[发明专利]一种制备桑青枯菌抗体的方法及其在DAS-ELISA检测方法上的应用在审
| 申请号： | 201910475412.3 | 申请日： | 2019-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN110386979A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 王俊;王金正;苏佳威;盛晟;吴福安 | 申请（专利权）人： | 江苏科技大学 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12;C12N15/06;G01N33/577;G01N33/569 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 楼高潮 |
| 地址： | 212003*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种制备桑青枯菌抗体的方法及其在DAS‑ELISA检测方法上的应用。以BALA/c小鼠为免疫动物，采用青枯菌活体菌株免疫，制备出抗青枯菌的单克隆抗体并用于构建青枯菌的DAS‑ELISA检测方法。使用菌悬液浓度为106‑108CFU/mL的活体青枯菌菌悬液免疫小鼠，并筛选出杂交瘤细胞，制备桑青枯菌DAS‑ELISA试剂盒，其中，0.1‑10％的脱脂奶粉或仅含有蛋白的药剂如牛血清白蛋白作为封闭液，TMB显色液时间为10‑60min，辣根过氧化氢酶标记的抗体作用时间为10‑60min，辣根过氧化氢酶标记的抗体稀释倍数为1:100‑1:5000,捕获抗体稀释倍数为1:100‑1:5000。本技术对桑青枯菌具有良好的检测灵敏度最低检测限为3.13×103CFU/mL，可实现在2.5h内对桑青枯菌的检测，且操作简便，检测快速。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 辣根过氧化氢酶 检测 菌抗体 牛血清白蛋白 单克隆抗体 检测灵敏度 杂交瘤细胞 捕获抗体 菌菌悬液 抗体稀释 抗体作用 免疫动物 免疫小鼠 脱脂奶粉 封闭液 菌活体 菌悬液 构建 活体 菌株 稀释 小鼠 应用 蛋白 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种制备桑青枯菌抗体的方法，其特征在于，以菌悬液浓度为106‑108CFU/mL的活体青枯菌菌悬液作为免疫抗原，对小鼠免疫处理后，取达到10000以上效价后的小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，筛选出分泌抗体蛋白的杂交瘤细胞，并对抗体蛋白进行纯化处理，即得桑青枯菌抗体9G9、1G9和2H5。
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