[发明专利]一种辣椒及制品中转基因成分检测及应用方法在审
| 申请号： | 201910318174.5 | 申请日： | 2019-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN109929922A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 罗阿东;王艳;吴山楠;蔡秋 | 申请（专利权）人： | 贵州出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心（贵州国际旅行卫生保健中心） |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 550081 贵州*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明属于食品安全技术领域，公开了一种辣椒及制品中转基因成分检测及应用方法，辣椒及制品中转基因成分检测方法为：样品前处理；选用改良后的核酸提取方法；针对辣椒转基因基团设计特异性的荧光PCR引物、探针，建立并优化反应条件，达到最佳反应设置；应用方法为：对以上建立的实时荧光PCR检测方法进行方法验证，同时对检测的特异性、准确性、灵敏度进行验证；通过对收集的样品进行应用检测的结果，对市场上的辣椒及制品进行转基因调查。本发明针对辣椒及制品的核酸提取，建立了最大核酸提取效率的方法，并且对辣椒及制品建立了一种通用性强、检测快速、准确的实时荧光PCR方法。 | ||
| 搜索关键词： | 辣椒 转基因成分检测 核酸提取 转基因 实时荧光PCR检测 验证 应用 优化反应条件 实时荧光PCR 样品前处理 食品安全 通用性强 应用检测 荧光PCR 灵敏度 检测 探针 引物 改良 调查 | ||
【主权项】：
1.一种辣椒及制品中转基因成分检测方法，其特征在于，所述辣椒及制品中转基因成分检测方法为：步骤一：样品前处理：采用洗涤方式，去除样品中的其他物质；步骤二：核酸提取：改良CTAB法进行辣椒制品核酸提取；步骤三：建立检测方法：针对辣椒转基因基团设计特异性的荧光PCR引物、探针，建立并优化反应条件，达到最佳反应设置；探针，其序列为：上游引物TMV1序列CATCCCAATTCGTGTTCTTGTC，下游引物TMV2序列CTTGTTGTGTTTGAAACTGATTTCCT，探针TMV Prober序列FAM‑TCAGCGTGGGCCGACCCAAT‑TAMRA建立并优化反应条件；反应体系为：Premix Ex TaqTM(2×)12.5μL、上游引物TMV1(10μM)1μL、下游引物TMV2(10μM)1μL、探针TMV Probe 0.5μL、ROX Reference Dye(50×)0.5μL、DNA模板3μL、灭菌ddH2O 6.5μL；反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性10s,60℃退火、延伸40s，40个循环。
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