[发明专利]水蛭素突变体的提取纯化方法及其应用有效
| 申请号： | 201910301614.6 | 申请日： | 2019-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN109957008B | 公开（公告）日： | 2021-12-24 |
| 发明（设计）人： | 陈杰鹏;段丽丽;陈鸿锐;胡留松;陈煜藩;洪琳;许志锴;叶红林;纪烨瑜;蔡春丽 | 申请（专利权）人： | 广东双骏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/815 | 分类号： | C07K14/815;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C12P21/02;A61J1/05;A61J1/14;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 凌翠;张奎燕 |
| 地址： | 515071 广东省汕头*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本申请公开了一种从大肠杆菌发酵生产水蛭素突变体HV2‑Lys47的发酵液中提取纯化水蛭素突变体HV2‑Lys47的方法，所述方法采用膜技术及一次柱层析技术，从而获得高纯度的水蛭素突变体HV2‑Lys47。本申请还公开了由此制备的水蛭素突变体HV2‑Lys47在抗凝采血管中的应用及包含水蛭素突变体HV2‑Lys47的抗凝采血管。 | ||
| 搜索关键词： | 水蛭 突变体 提取 纯化 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种从大肠杆菌发酵生产水蛭素突变体HV2‑Lys47(SEQ ID NO.:1)的发酵液中提取纯化水蛭素突变体HV2‑Lys47的方法，包括以下步骤：在升高的温度下处理大肠杆菌发酵液，以灭菌且去除杂蛋白；通过陶瓷膜或通过离心机来处理灭菌的发酵液，以去除菌体；可选地，通过超滤膜来处理通过陶瓷膜或离心机的发酵液，以去除杂蛋白；通过纳滤膜来处理通过陶瓷膜或离心机的发酵液、或通过超滤膜的发酵液，以获得粗分离的浓缩液；将盐添加到所述粗分离的浓缩液中作为辅料，喷雾干燥，得到干粉；将所述干粉溶解在水中并过滤除杂，可选地通过滤纸、砂芯漏斗或膜设备来进行过滤；使滤液仅通过分子筛柱层析1次，用水洗脱，浓缩收集液，得到水蛭素突变体HV2‑Lys47粗品；将所述水蛭素突变体HV2‑Lys47粗品溶解到水中，然后向其中添加盐或有机溶剂，以沉淀出水蛭素突变体HV2‑Lys47，干燥即得水蛭素突变体HV2‑Lys47纯品，可选地进行真空干燥，更可选地进行冷冻真空干燥。
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