[发明专利]一种基于酶切的巢式PCR方法有效
| 申请号： | 201910296963.3 | 申请日： | 2019-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN110055310B | 公开（公告）日： | 2022-12-16 |
| 发明（设计）人： | 曹文刚;王珍珍 | 申请（专利权）人： | 湖北擎科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6848 | 分类号： | C12Q1/6848 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 436000 湖北省鄂州市葛*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于酶切的巢式PCR方法，属于基因工程技术领域，解决了大批量PCR扩增不稳定及DNA的非特异性问题。方法包括以下步骤：S1、将第一轮PCR引物的两端加上限制性内切酶酶切位点序列，进行第一轮PCR扩增；S2、将扩增后片段连入克隆载体中，提取质粒挑选正确的克隆；S3、使用相应的限制性内切酶酶切重组载体，切下的片段进行琼脂糖凝胶电泳纯化；S4、使用第二轮PCR引物对步骤S3纯化后片段进行第二轮PCR的扩增。本发明提供的基于酶切的巢式PCR方法，整个流程使用两对引物，得到的模板进行二轮扩增时特异性远高于常规的巢式PCR，且使用这个模板进行大批量的PCR扩增时十分稳定，也不会产生非特异性扩增。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 pcr 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于酶切的巢式PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将第一轮PCR引物的两端加上限制性内切酶酶切位点序列，进行第一轮PCR扩增；S2、将扩增后片段连入克隆载体中，提取质粒挑选正确的克隆；S3、使用相应的限制性内切酶酶切重组载体，切下的片段进行琼脂糖凝胶电泳纯化；S4、使用第二轮PCR引物对步骤S3纯化后片段进行第二轮PCR的扩增。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湖北擎科生物科技有限公司，未经湖北擎科生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910296963.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
