[发明专利]一种基于酶切的巢式PCR方法有效
| 申请号： | 201910296963.3 | 申请日： | 2019-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN110055310B | 公开（公告）日： | 2022-12-16 |
| 发明（设计）人： | 曹文刚;王珍珍 | 申请（专利权）人： | 湖北擎科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6848 | 分类号： | C12Q1/6848 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 436000 湖北省鄂州市葛*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 pcr 方法 | ||
1.一种基于酶切的巢式PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将第一轮PCR引物的两端加上限制性内切酶酶切位点序列，进行第一轮PCR扩增；
S2、将扩增后片段连入克隆载体中，提取质粒挑选正确的克隆；
S3、使用相应的限制性内切酶酶切重组载体，切下的片段进行琼脂糖凝胶电泳纯化；
S4、使用第二轮PCR引物对步骤S3纯化后片段进行第二轮PCR的扩增；
100bp片段的第一轮PCR引物如SEQ ID 1和SEQ ID 2所示，第二轮PCR引物如SEQ ID 15和SEQ ID 16所示；
150bp片段的第一轮PCR引物如SEQ ID 3和SEQ ID 4所示，第二轮PCR引物如SEQ ID 17和SEQ ID 18所示；
200bp片段的第一轮PCR引物如SEQ ID 5和SEQ ID 6所示，第二轮PCR引物如SEQ ID 19和SEQ ID 20所示；
250bp片段的第一轮PCR引物如SEQ ID 7和SEQ ID 8所示，第二轮PCR引物如SEQ ID 21和SEQ ID 22所示；
300bp片段的第一轮PCR引物如SEQ ID 9和SEQ ID 10所示，第二轮PCR引物如SEQ ID23和SEQ ID 24所示；
400bp片段的第一轮PCR引物如SEQ ID 11和SEQ ID 12所示，第二轮PCR引物如SEQ ID25和SEQ ID 26所示；
500bp片段的第一轮PCR引物如SEQ ID 13和SEQ ID 14所示，第二轮PCR引物如SEQ ID27和SEQ ID 28所示。
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