[发明专利]一种莱茵衣藻细胞核高效转化外源基因的方法在审
| 申请号： | 201910218911.4 | 申请日： | 2019-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN109777822A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 王川;黄亚萍;张孟萍 | 申请（专利权）人： | 四川轻化工大学 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 苗艳荣 |
| 地址： | 643002 四川省*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种莱茵衣藻细胞核高效转化外源基因的方法，该方法包含：采用限制性核酸内切酶进行质粒单酶切试验，以制备线性质粒；其中，限制性核酸内切酶包含：BamH Ⅰ、Xba Ⅰ、EcoR Ⅰ和Sac Ⅰ中的任意一种；采用玻璃珠法转化线性质粒：将对数中期的莱茵衣藻采用培养基重悬，加入3～5μg质粒和灭菌的玻璃珠，震荡24～26s后的衣藻转入新的培养基中，黑暗复苏；待复苏后，采用含14～16μg/mL博来霉素的培养基依次光照和黑暗培养，获得莱茵衣藻转化子。本发明的方法能够提高转化率，实现线性质粒整合进入核基因组中。 | ||
| 搜索关键词： | 莱茵衣藻 线性质粒 培养基 限制性核酸内切酶 细胞核 高效转化 外源基因 质粒 复苏 玻璃珠法 核基因组 黑暗培养 玻璃珠 单酶切 转化子 灭菌 衣藻 整合 重悬 制备 光照 震荡 转入 黑暗 试验 转化 | ||
【主权项】：
1.一种莱茵衣藻细胞核高效转化外源基因的方法，其特征在于，该方法包含：采用限制性核酸内切酶进行质粒单酶切试验，以制备线性质粒；其中，所述限制性核酸内切酶包含：BamHⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ和SacⅠ中的任意一种；采用玻璃珠法转化线性质粒：将对数中期的莱茵衣藻采用培养基重悬，加入3～5μg质粒和灭菌的玻璃珠，震荡24～26s后的衣藻转入新的培养基中，黑暗复苏；待复苏后，采用含14～16μg/mL博来霉素的培养基依次光照和黑暗培养，获得莱茵衣藻转化子。
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