[发明专利]一种利用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量评价低剂量伽马射线辐照损伤的方法

摘要

本发明涉及一种利用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量评价低剂量伽马射线辐照损伤的方法。根据斑马鱼胚胎接受的辐照剂量与ywhah基因表达量之间的剂量‑效应关系，通过计算斑马鱼胚胎ywhah基因表达量的抑制率，评估低剂量伽马射线辐照对斑马鱼胚胎的综合毒性作用，建立生物损伤评价方法。该方法具有操作简便快速、灵敏度高、准确性好、环境风险小等多重优点。解决了现有低剂量伽马射线辐照损伤评估方法所需周期长、操作复杂、特异性不强等难题。

主权项

1.一种利用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量评价低剂量伽马射线辐照损伤的方法，根据随着接受伽马射线辐照剂量的增大，斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量降低，从而bada基因的表达增加，导致细胞凋亡率上升，辐射损伤程度增大，其特征在于，通过计算斑马鱼胚胎ywhah基因表达量的抑制率，评估低剂量伽马射线辐照对斑马鱼胚胎的综合毒性作用，建立生物损伤评价方法，具体步骤是：（1）胚胎的采集；（2）胚胎的培养；（3）伽马射线辐照；（4）ywhah基因表达量的检测；（5）综合评价；所述胚胎的采集的方法是：采用5 ~ 6 月龄的斑马鱼进行繁殖产卵，并用孵化液冲洗胚胎；所述胚胎的培养的方法是：收集的斑马鱼胚胎冲洗干净后，放入细胞培养板中，培养板中倒入10 mL的孵化液, 在28℃ ± 0.5℃的温度下培养2 h；所述伽马射线辐照的方法是：待斑马鱼胚胎培养至2 h，使斑马鱼胚胎在剂量率为0.063‑0.250 mGy/h的伽马射线辐照下及在28℃ ± 0.5℃的温度下培养120 h；所述ywhah基因表达量的检测的方法是：斑马鱼胚胎发育至120 h时，在显微镜下切取斑马鱼头部，提取总RNA，进行RT‑PCR检测，其具体步骤为，设计引物为ATGGGGGACCGGGAGCA，在RT‑PCR仪中，设定程序为（a）95 ℃ 3 min，（b）95 ℃ 10 s，（c）67.3 ℃ 30 s，（b）和（c）进行39个循环， RT‑PCR完成后，最后进行熔融曲线分析，确定ywhah基因的表达量；所述的综合评价的方法是：在120 h时，ywhah基因表达量的抑制率按下式计算：   （1）采用计算得到的ywhah基因表达量的抑制率，对低剂量伽马射线辐照对斑马鱼胚胎的生物损伤进行评估。