[发明专利]一种利用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量评价低剂量伽马射线辐照损伤的方法

说明书

本发明涉及一种利用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量评价低剂量伽马射线辐照损伤的方法。根据斑马鱼胚胎接受的辐照剂量与ywhah基因表达量之间的剂量‑效应关系，通过计算斑马鱼胚胎ywhah基因表达量的抑制率，评估低剂量伽马射线辐照对斑马鱼胚胎的综合毒性作用，建立生物损伤评价方法。该方法具有操作简便快速、灵敏度高、准确性好、环境风险小等多重优点。解决了现有低剂量伽马射线辐照损伤评估方法所需周期长、操作复杂、特异性不强等难题。

技术领域

本发明属于低剂量伽马射线辐照损伤评价技术领域，具体涉及一种利用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量评价低剂量伽马射线辐照损伤的方法。

背景技术

医疗卫生上的辐照治疗和辐照诊断以及核电站、核潜艇、核武器、铀矿山工作人员每年都会接受低剂量伽马射线辐照，低剂量伽马射线辐照诱导的生物效应的程度普遍较低，这种程度很低的生物效应同时还受机体自我修复机制、内稳态调节机制和其他各种内外因素的干扰和影响，特异性生物效应需要较长时间才能出现，这使得低剂量伽马射线辐照生物效应的研究和观察十分困难，让我们很难科学认识和正确评估低剂量伽马射线辐照的效应及后果。因此，研发低剂量伽马射线辐照损伤的评价方法，为低剂量伽马射线辐照诱导的人类疾病的诊断和开发新的治疗方法来预防或治疗辐照损伤提供数据支持，明确低剂量伽马射线辐照对生物的辐照损伤效应及低剂量伽马射线辐照生物标志物的筛查，是保护暴露于低剂量伽马射线辐照下的公众人员和有关从业人员健康最紧迫的任务之一。

模式生物斑马鱼(Danio rerio) 因易于培养，产卵期短，繁殖能力高，早期发育胚胎透明而被广泛用于化学混合物的急性和慢性毒性试验、药物筛选和生态毒理学试验。斑马鱼与人类在基因上有87%的同源性，其主要的信号通路、生理结构和功能与哺乳动物高度相似，这意味着斑马鱼毒理学试验的结果在大多数情况下也可以应用于人类。美国国立卫生研究院主张，斑马鱼可以作为继小鼠和大鼠之后的第三种脊椎动物模型生物，用于研究小鼠和大鼠之后的人类疾病。在辐照损伤与辐照防护研究领域，斑马鱼及其胚胎也已经被用于辐照防护药物的筛选及机理研究。本发明专利利用发明人发现的斑马鱼胚胎对伽马射线辐照敏感的特性，且斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量与低剂量伽马射线辐照剂量存在着剂量-效应关系，采用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量对低剂量伽马射线辐照损伤进行综合评价。

发明内容

针对上述情况，本发明提供一种用斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量对低剂量伽马射线辐照损伤进行评价的方法。发明人对接受了低剂量伽马射线辐照的斑马鱼胚胎脑部进行了全基因组测序，发现了斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达对低剂量伽马射线辐照具有敏感性，并随着低剂量伽马射线辐照剂量的逐渐增大，ywhah基因的表达量逐渐降低，bada的表达就会增加，从而导致细胞凋亡率上升，辐射损伤程度增大。 根据斑马鱼胚胎接受的辐照剂量与脑部ywhah基因的表达量之间的存在的剂量-效应关系，通过检测斑马鱼胚胎脑部ywhah基因的表达量，来评估低剂量伽马射线辐照对斑马鱼胚胎的损伤。其原理是，在pi3k/Akt信号通路上，低剂量的伽马射线辐照会诱导ywhah基因的表达降低，ywhah基因表达降低会导致对bada基因的抑制作用减小，从而使bada的表达增加，而bada的表达增加会导致细胞凋亡率上升，从而损伤增大。该方法具有操作简便快速、灵敏度高、准确性好等多重优点。

具体步骤是：

（1）胚胎的采集；

（2）胚胎的培养；

（3）伽马射线辐照；

（4）ywhah基因表达量的检测；

（5）综合评价。

其进一步的措施是：

所述胚胎的采集的方法是：