[发明专利]一种牙龈卟啉单胞菌PgPPX的表达纯化方法及制备得到的PgPPX在审
| 申请号： | 201910121851.4 | 申请日： | 2019-02-18 |
| 公开（公告）号： | CN109735514A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 张爱莉;卢作焜 | 申请（专利权）人： | 许昌学院 |
| 主分类号： | C12N9/14 | 分类号： | C12N9/14;C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 郑州铭晟知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 41134 | 代理人： | 张鹏 |
| 地址： | 461000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种牙龈卟啉单胞菌PgPPX的表达纯化方法及制备得到的PgPPX。PgPPX的表达纯化方法包括如下步骤：(1)设计引物，将目的基因构建在大肠杆菌表达载体pGEx‑6p‑1上得到重组载体；(2)将上述构建好的重组载体转化到大肠杆菌高效表达菌株BL21(DE3)中，得到重组工程菌；(3)使所述重组工程菌在LB液体培养基中振荡培养，利用IPTG诱导表达蛋白，离心收集菌体，超声波破碎细胞，纯化目的蛋白PgPPX。采用上述PgPPX的表达纯化方法每升LB培养基的PgPPX蛋白表达量高达20～30mg。 | ||
| 搜索关键词： | 牙龈卟啉单胞菌 重组工程菌 重组载体 构建 制备 超声波破碎细胞 大肠杆菌表达 高效表达菌株 基因工程技术 离心收集菌体 大肠杆菌 蛋白表达量 表达蛋白 目的蛋白 目的基因 设计引物 载体pGEx 振荡培养 转化 | ||
【主权项】：
1.一种牙龈卟啉单胞菌PgPPX的表达纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计引物，利用PCR技术扩增编码PgPPX的目的基因，将目的基因构建在大肠杆菌表达载体pGEx‑6p‑1上得到重组载体，重组载体扩增，筛选重组载体；(2)将上述构建好的重组载体转化到大肠杆菌高效表达菌株BL21(DE3)中，得到重组工程菌；(3)使所述重组工程菌在LB液体培养基中振荡培养，利用IPTG诱导表达蛋白，离心收集菌体，超声波破碎细胞，离心，收集上清液并从上清液中纯化目的蛋白PgPPX。
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