[发明专利]一种基于CRISPR/Cas和lambda Red重组系统的体内质粒编辑系统及其应用在审
| 申请号： | 201910089302.3 | 申请日： | 2019-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN109706109A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 孙义成;耿艺漫;严海芹;任改仙;郭晓鹏;钱朝晖;赵振东;金奇 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院病原生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/90;C12N15/65;C12N15/113;C40B50/06;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京万象新悦知识产权代理有限公司 11360 | 代理人： | 李稚婷 |
| 地址： | 100730*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公布了一种基于CRISPR/Cas和lambda Red重组系统的体内质粒编辑系统及其应用。所述体内质粒编辑系统包括：HsdR功能缺失且基因组中整合有可诱导表达的λRed重组蛋白基因和可诱导表达的Cas蛋白基因的大肠杆菌工程菌株，插入靶标序列的crRNA表达质粒，以及等位交换底物和靶标质粒。本发明将CRISPR‑Cas系统与重组工程整合使用，建立一种快速且无痕的体内质粒编辑方法，可方便快捷地在大肠杆菌中对质粒进行基因删除、点突变和片段插入，以及建立质粒突变库。 | ||
| 搜索关键词： | 体内质粒 编辑系统 诱导表达 靶标 整合 质粒 大肠杆菌工程菌 重组蛋白基因 大肠杆菌 表达质粒 蛋白基因 功能缺失 基因删除 片段插入 点突变 基因组 突变库 底物 无痕 应用 交换 | ||
【主权项】：
1.一种体内质粒编辑系统，对靶标质粒进行体内基因编辑，其包括大肠杆菌工程菌株、pAC‑crRNA质粒、等位交换底物和靶标质粒，其中：所述大肠杆菌工程菌株HsdR功能缺失，且在其基因组中整合有可诱导表达的λRed重组蛋白基因和可诱导表达的Cas蛋白基因；所述pAC‑crRNA质粒含有组成型启动子驱动的直接重复序列‑间隔序列‑直接重复序列单元，其中所述间隔序列包含靶标序列连入位点；所述等位交换底物为单链DNA或线性双链DNA。
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