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[发明专利]HIF2α基因突变体及其在构建NAFLD小鼠模型中的应用-CN202211253331.7在审
发明人： 曹红翠;俞炯;李兰娟;高飞琼 -专利权人：浙江大学医学院附属第一医院
申请日： 2022-10-13 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C07K14/705 文献下载
摘要：本发明涉及一种HIF2α基因突变体、载体，及其在构建NAFLD小鼠模型中的应用。利用该突变体构建的基因突变小鼠可以稳定传代，在实际应用中方便研究HIF2α基因在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠中的致病机制，在人类NAFLD肝脏不易获得且受医学伦理制约的情况下，本申请提供的小鼠模型将成为非酒精性脂肪性肝病研究中的重要工具，在致病机理、治疗方法以及药物筛选等方面的研究中提供可稳定遗传的研究模型。
hif2 基因突变体及其构建 nafld 小鼠模型中的应用

[发明专利]一种高效分离小鼠肝脏胆管细胞的方法-CN202011180816.9有效
发明人： 曹红翠;陈文怡;俞炯;潘巧玲;杨金凤 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-10-29 - 公布日： 2022-12-20 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及细胞分离技术，旨在提供一种高效分离小鼠肝脏胆管细胞的方法。包括主要步骤：分离肝脏内胆管；沉降与多步离心富集导管干细胞；消化成单个细胞。本发明通过胆管片段的重力沉降和多步骤离心，分离得到较纯的胆管细胞。本发明能够提高细胞得率和细胞活率。与显微镜下手工挑选胆管细胞相比，由于减少了手工操作步骤，能够减轻操作者的工作负担；与流式细胞分选术相比，由于不需要孵育流式抗体和使用流式分析仪，因此能够降低经济成本。
一种高效分离小鼠肝脏胆管细胞方法

[发明专利]一种戊型肝炎相关急性肝衰竭目标预后评估方法-CN202210942331.1在审
发明人：吴健;曹红翠;翟光华;俞炯;向泽;王滢 -专利权人：苏州市立医院
申请日： 2022-08-08 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： G16H50/00 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种戊型肝炎相关急性肝衰竭目标预后评估方法，包括对第一回顾性队列进行分析，得到建模队列；利用建模队列决策曲线分析构建预后诊断模型；使用第二回顾性队列对预后诊断模型进行深度验证，得到新型预后诊断模型；利用决策曲线分析评估新型预后诊断模型在不同阈值概率下辅助决策的净效益，同时将新型预后诊断模型与传统模型进行比较分析，得到最优预后诊断模型；使用最优预后诊断模型对戊型肝炎相关急性肝衰竭目标进行预后评估，得到评估结果，本发明所构建的最优预后诊断模型高效高灵敏度，解决了现有的模型不能对戊型肝炎相关急性肝衰竭预后做出精准判断的问题。
一种肝炎相关急性衰竭目标预后评估方法

[发明专利]一种戊型肝炎相关急性肝衰竭目标预后诊断标志方法-CN202210930871.8在审
发明人：吴健;曹红翠;翟光华;俞炯;向泽;王滢 -专利权人：苏州市立医院
申请日： 2022-08-04 - 公布日： 2022-11-01 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种戊型肝炎相关急性肝衰竭目标预后诊断标志方法，包括以AHE血清为对照，鉴定HEV‑ALF血清的蛋白表达谱差异，得到差异蛋白；对差异蛋白进行聚类分析，得到分析信息；基于分析信息对差异蛋白进行筛选后定量分析，得到差异蛋白标志物；监测差异蛋白标志物的水平指标，并基于水平指标预测目标预后情况，本发明通过对得到的差异蛋白标志物进行连续监测来对目标的预后情况进行预测，解决了现有技术无法预测和评估戊型肝炎相关急性肝衰竭目标的预后的问题。
一种肝炎相关急性衰竭目标预后诊断标志方法

[发明专利]从小鼠致密骨中高效获取间充质干细胞的方法-CN201710628074.3有效
发明人： 曹红翠;李兰娟;俞炯;曾浔;潘巧玲 -专利权人：浙江大学
申请日： 2017-07-28 - 公布日： 2020-07-28 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及间充质干细胞获取方法，旨在提供一种从小鼠致密骨中高效获取间充质干细胞的方法。提供一种高效获取小鼠间充质干细胞的方法，包括小鼠间充质干细胞的分离、原代培养、小鼠间充质干细胞的扩增培养等步骤。本发明极大程度缩短了细胞培养所用时间，获取的细胞量极大提升，更少的非MSCs贴壁细胞的污染的优势。本发明首次建立多次骨片贴片培养法，使细胞得率提高3‑5倍。本发明通过对小鼠致密骨MSCs生物学特性如生长状态、表面标志物、多向分化潜能等方面的系统研究，证实了经体外10次扩增培养以后，细胞仍具有较强的干细胞特性，可满足实验研究的需要。不但能快速高效获取干细胞，而且获得的干细胞具有较快的增殖生长速度，及较强的分化潜能。
小鼠致密高效获取间充质干细胞方法

[发明专利]一种YAP1基因修饰的间充质干细胞及其制备方法-CN202010007670.1在审
发明人： 曹红翠;冯旭东;俞炯;潘巧玲;杨金凤 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-01-05 - 公布日： 2020-04-28 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种YAP1基因修饰的间充质干细胞及其制备方法。该间充质干细胞是以过表达YAP1基因修饰的原代间充质干细胞，其中YAP1基因来源于YAP1慢病毒载体或YAP1质粒载体，原代间充质干细胞的来源是下述任意一种人体组织：胎盘、脐带或脂肪组织。本发明获得的YAP1基因修饰的间充质干细胞，不影响MSC本身表型和分化能力；通过利用过表达YAP1基因修饰间充质干细胞，本发明可以显著促进间充质干细胞的增殖，进一步提高细胞的产量；因此能够快速获得大量的间充质干细胞用于临床干细胞移植治疗。
一种 yap1 基因修饰间充质干细胞及其制备方法

[发明专利]一种急性肝衰竭小鼠肝脏全免疫细胞特征图谱的绘制方法-CN201910551172.0在审
发明人： 曹红翠;刘景琪;冯旭东;俞炯;潘巧玲;徐燕萍;曾浔;李兰娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-06-24 - 公布日： 2019-10-15 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及肝脏全免疫细胞特征图谱研究，旨在提供一种急性肝衰竭小鼠肝脏全免疫细胞特征图谱的绘制方法。包括步骤：小鼠肝脏全免疫细胞的提取；质谱流式抗体的标记；免疫细胞抗体染色；质谱流式分析。本发明能够在保证细胞纯度的基础上，尽可能的去除肝脏实质细胞，分离出高得率的小鼠肝脏全免疫细胞。本发明分离的小鼠肝脏全免疫细胞得率在高于研磨法得率，且细胞活率大于传统研磨法。本发明根据肝脏、肺脏中免疫细胞特点，创新性地使用试剂盒以稳定金属同位素与抗体连接，同时基于通道干扰最小原则设计质谱流式通道，实现全面小鼠对肝脏全免疫细胞的分类和功能进行描述，最多可同时检测43个标志物，能够观察到小鼠肝脏全免疫细胞的动态改变。
免疫细胞小鼠肝脏特征图谱得率抗体质谱肝脏急性肝衰竭研磨法流式绘制肝脏实质细胞创新性地流式分析通道干扰稳定金属细胞纯度最小原则同位素标志物试剂盒染色去除小鼠细胞分类观察检测保证研究

[发明专利]一种急性肺损伤小鼠肺脏全免疫细胞特征图谱的建立方法-CN201910551631.5在审
发明人： 曹红翠;刘景琪;徐燕萍;朱嘉琪;冯旭东;冯冰;俞炯;潘巧玲;李兰娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-06-24 - 公布日： 2019-10-15 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及肺脏全免疫细胞特征图谱研究，旨在提供一种急性肺损伤小鼠肺脏全免疫细胞特征图谱的建立方法。包括步骤：小鼠肺脏全免疫细胞的提取；质谱流式抗体的标记；免疫细胞抗体染色；质谱流式分析。本发明能够在保证细胞纯度的基础上，分离出高得率的小鼠肺脏全免疫细胞。分离的小鼠肺脏全免疫细胞得率高于研磨法，且细胞活率大于传统研磨法。本发明创新性地使用试剂盒以稳定金属同位素与抗体连接，同时基于通道干扰最小原则设计质谱流式通道，实现全面小鼠对肺脏全免疫细胞的分类和功能进行描述。能够对小鼠肺脏免疫细胞进行系统性的检测和分类，最多可同时检测43个标志物；观察到小鼠肺脏全免疫细胞的动态改变。
免疫细胞小鼠特征图谱抗体质谱急性肺损伤研磨法得率流式创新性地流式分析通道干扰稳定金属细胞纯度最小原则同位素标志物试剂盒分类检测染色细胞观察保证研究

[发明专利]基于CILLC-MS的评价GFP基因转染对hPMSCs代谢组学影响的方法-CN201710628078.1有效
发明人： 曹红翠;李兰娟;俞炯;陈德莹 -专利权人：浙江大学
申请日： 2017-07-28 - 公布日： 2019-09-27 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明涉及胎盘来源间充质干细胞代谢物的萃取及检测技术，旨在提供一种基于CILLC‑MS的评价GFP基因转染对hPMSCs代谢组学影响的方法。本发明通过萃取、检测GFP基因转染前后的hPMSCs的胞内代谢物，并对其进行定量，深入分析转染前后的差异性代谢物及差异性代谢途径，从代谢组学角度评估绿色荧光蛋白用于标记和示踪间充质干细胞的生物安全性。本发明首创比较hPMSCs与GFP+hPMSCs代谢组学差异的分析流程，将两种样品制备方法结合用于干细胞代谢物萃取，使细胞内代谢物充分释放。结合CIL LC‑MS用于干细胞胞内代谢物检测，实现了胞内代谢物的精准定量分析，并大大增加代谢产物的鉴定种类。本发明极大地提高了结果的灵敏性，可靠性和重复性，避免了操作上引起的不平行性及偶然性。
基于 cillc ms 评价 gfp 基因转染 hpmscs 代谢影响方法

[发明专利]一种高效获取小鼠肺脏全免疫细胞的方法-CN201910551630.0在审
发明人： 曹红翠;刘景琪;徐燕萍;朱嘉琪;冯冰;冯旭东;俞炯;潘巧玲;李兰娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-06-24 - 公布日： 2019-09-20 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及动物细胞提取方法，旨在提供一种高效获取小鼠肺脏全免疫细胞的方法。该方法包括：经心脏持续灌流、冲洗小鼠肺脏后，剪碎肺脏进行解离和消化；过滤后多次离心处理，对所得沉淀进行裂解以完全去除红细胞；终止裂红后再次离心处理；弃上清，得到纯净肺脏全免疫细胞。本发明能够在保证细胞纯度的基础上分离出高得率的小鼠肺脏全免疫细胞.与现有技术中研磨法分离的结果相比，本发明分离的小鼠肺脏全免疫细胞得率在大于5×10⁶/只，高于研磨法得率的1～2.5×10⁶/只，且细胞活率大于95％，大于传统研磨法细胞活率约85％。
免疫细胞小鼠研磨法得率高效获取红细胞细胞动物细胞多次离心离心处理细胞纯度灌流剪碎解离裂解去除冲洗沉淀过滤心脏消化保证

[发明专利]一种高效获取小鼠肝脏全免疫细胞的方法-CN201910564045.4在审
发明人： 曹红翠;冯旭东;俞炯;潘巧玲;刘景琪;李兰娟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-06-24 - 公布日： 2019-09-20 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及动物细胞提取方法，旨在提供一种高效获取小鼠肝脏全免疫细胞的方法。提供一种高效获取小鼠肝脏全免疫细胞的方法，包括：对小鼠肝脏静脉灌流、冲洗后，剪碎进行解离和消化；过滤后多次离心处理，对所得沉淀进行裂解以完全去除红细胞；终止裂红后再次离心处理；弃上清，得到纯净肝脏全免疫细胞。本发明能够在保证细胞纯度的基础上尽可能多地去除肝脏实质细胞，分离出高得率的小鼠肝脏全免疫细胞。与现有技术中研磨法分离的结果相比，本发明分离的小鼠肝脏全免疫细胞得率在大于5×106/只，高于研磨法得率的1～2.5×106/只，且细胞活率大于95％，大于传统研磨法细胞活率约85％。
免疫细胞小鼠肝脏高效获取研磨法得率去除红细胞肝脏实质细胞细胞动物细胞多次离心静脉灌流离心处理细胞纯度剪碎解离裂解冲洗肝脏沉淀过滤消化保证

[发明专利]HIF2A基因突变体及其检测与应用-CN201410172171.2有效
发明人：李兰娟;曹红翠;苏晓茹;俞炯 -专利权人：浙江大学
申请日： 2014-04-25 - 公布日： 2014-08-20 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明涉及医学分子生物学领域，旨在提供一种HIF2A基因突变体及其检测与应用。该分离的编码HIF2A突变体核酸的基因序列如SEQ ID NO：1所示。分离的HIF2A突变体多肽是由前述突变体核酸编码的，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明研究发现人HIF2A基因的SEQ ID NO：1所示序列中第2155位核苷酸G→A突变，导致SEQ ID NO：2所示序列中的第549位谷氨酸(E)变为赖氨酸(K)，使蛋白质的半衰期延长，下游基因的表达增高。基于此，本发明提供了HIF2A基因突变的检测方法。通过对该方法的应用，能够快速了解生物样品是否存在HIF2A基因突变。
hif2a 基因突变体及其检测应用

[发明专利]类肝小叶生物反应器-CN201110064200.X有效
发明人：李兰娟;喻成波;章益民;潘小平;杜维波;曹红翠;吕国良;黄建荣 -专利权人：浙江大学
申请日： 2011-03-17 - 公布日： 2011-07-06 - 主分类号： A61M1/36 文献下载
摘要：本发明公开一种类肝小叶生物反应器，属于生物医学设备领域。在其外壳内设有纳米纤维支架网，肝内纤维血管网、毛细胆管网、上肝胆管、下肝胆管、胆总管和肝细胞胶原纤维微管道分布于整个纳米纤维支架网中，且毛细胆管网分布于肝细胞胶原纤维微管道的周围；上肝胆管和下肝胆管通过胆总管连通；毛细胆管网中的毛细胆管设有两个以上毛细胆管上皮细胞入口；肝细胞胶原纤维微管道设有两个以上肝细胞注入口；肝内纤维血管网设有液体进口和液体出口；毛细胆管上皮细胞入口、肝细胞注入口、液体进口、液体出口和胆总管的下端出口穿过所述外壳。本发明真实地模拟了肝小叶的结构，发挥了肝脏的代谢解毒和排泄等功能，为以往任何生物反应器所不具备。
小叶生物反应器

[发明专利]胎盘来源的间充质干细胞表面差异膜蛋白的检测方法-CN201110001894.2有效
发明人：李兰娟;曹红翠;俞炯 -专利权人：浙江大学
申请日： 2011-01-06 - 公布日： 2011-06-15 - 主分类号： G01N27/447 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞差异膜蛋白的检测方法，旨在提供一种胎盘来源的间充质干细胞表面差异膜蛋白的检测方法。该方法包括：间充质干细胞的分离和培养、间充质干细胞膜蛋白的提取、双向荧光差异凝胶电泳法获取膜蛋白凝胶图谱、质谱分析及验证。本发明首次将2D-DIGE用来对干细胞膜表面特殊差异表面标志的检测，可以在同一块凝胶上对不同样品中蛋白质进行定量比较分析，在每块凝胶中加入了内标，DIA和BVA软件可以自动地根据每个蛋白质点的内标对其表达量进行校准，最大程度上降低了不同批次胶与胶之间的误差，反应了蛋白质的真实改变程度，降低了假阳性率及假阴性率。
胎盘来源间充质干细胞表面差异膜蛋白检测方法

[实用新型]人工肝用纤维网片叠加式生物反应器-CN200920119349.1有效
发明人：李兰娟;朱春侠;喻成波;曹红翠;杜维波;潘小平 -专利权人：浙江大学
申请日： 2009-05-07 - 公布日： 2010-03-10 - 主分类号： A61M1/18 文献下载
摘要：本实用新型涉及医疗设备，旨在提供一种人工肝用纤维网片叠加式生物反应器。该反应器包括反应器外壳，反应器外壳内布置若干纵向叠加的中空纤维网片，中空纤维网片由中空纤维编织而成，若干竖向布置的中空纤维穿过前述中空纤维网片的网格的中心，所述中空纤维均为聚砜中空纤维；反应器外壳的底端设细胞悬液入口和液体入口，顶端设细胞悬液出口和液体出口，侧壁对向设置气体入口和气体出口。本实用新型具备三维立体培养结构、兼具氧合和免疫阻隔功能、细胞活性和功能佳、易于放大。
人工纤维叠加生物反应器

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