[发明专利]一种提高液相色谱纯化中蜂王浆主蛋白2和3产量的方法有效
| 申请号： | 201910061877.4 | 申请日： | 2019-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN109535239B | 公开（公告）日： | 2021-12-03 |
| 发明（设计）人： | 霍新梅 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蜜蜂研究所 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 马进 |
| 地址： | 100093 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 一种提高液相色谱纯化中蜂王浆主蛋白2和3产量的方法，包括步骤：将蜂王浆溶于抽提缓冲液中，混合均匀，离心取上清，上清加入饱和硫酸铵进行沉淀，离心后取上清，通过滤膜过滤得样品缓冲溶液；通过超滤离心管将样品缓冲溶液置换为pH7.0缓冲液A；将蜂王浆样品上样到用缓冲液A平衡过的预装弱阳离子层析柱；以缓冲液A和缓冲液B的混合液对柱子进行梯度洗脱，并从0到100％逐渐提高缓冲液B的比例，依次分离纯化出蜂王浆主蛋白2和3。本发明的一种提高液相色谱纯化中蜂王浆主蛋白2和3产量的方法，增加了蜂王浆主蛋白2和3的丰度，提高了蜂王浆主蛋白2和3的产量，重复性好，产量高，可大量生产蜂王浆主蛋白2和3。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 色谱 纯化 蜂王浆 蛋白 产量 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高液相色谱纯化中蜂王浆主蛋白2和3产量的方法，其特征在于，包括步骤：S1：将蜂王浆溶于pH7.4的抽提缓冲液中，震荡过夜，低温离心，取上清，将饱和硫酸铵加入上清，至硫酸铵终浓度为30％～60％，混合均匀，低温孵育1小时或过夜；S2：取步骤S1中混合液4℃离心20分钟，取上清，上清以0.2微米孔径的滤膜过滤得样品缓冲溶液；S3：通过截留分子量为10K的超滤离心管将样品缓冲溶液置换为pH7.0缓冲液A；S4：将步骤S3制备的蜂王浆样品上样到用缓冲液A平衡过的预装弱阳离子层析柱；S5：通过层析仪的梯度混合器将缓冲液A和pH7.5的缓冲液B按比例混合，以缓冲液A和缓冲液B的混合液按照1ml/min的流速对柱子进行梯度洗脱，并从0到100％逐渐提高缓冲液B的比例，依次分离纯化出蜂王浆主蛋白2和3。
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