[发明专利]一种提高液相色谱纯化中蜂王浆主蛋白2和3产量的方法

权利要求书

1.一种提高液相色谱纯化中蜂王浆主蛋白2和3产量的方法，其特征在于，包括步骤：

S1：将蜂王浆溶于pH7.4的抽提缓冲液中，震荡过夜，低温离心，取上清，将饱和硫酸铵加入上清，至硫酸铵终浓度为30％～60％，混合均匀，低温孵育1小时或过夜；

S2：取步骤S1中混合液4℃离心20分钟，取上清，上清以0.2微米孔径的滤膜过滤得样品缓冲溶液；

S3：通过截留分子量为10K的超滤离心管将样品缓冲溶液置换为pH7.0缓冲液A；

S4：将步骤S3制备的蜂王浆样品上样到用缓冲液A平衡过的预装弱阳离子层析柱；

S5：通过层析仪的梯度混合器将缓冲液A和pH7.5的缓冲液B按比例混合，以缓冲液A和缓冲液B的混合液按照1ml/min的流速对柱子进行梯度洗脱，并从0到100％逐渐提高缓冲液B的比例，依次分离纯化出蜂王浆主蛋白2和3；

所述步骤S1具体包括：将蜂王浆按照1：5溶于pH 7.4的抽提缓冲液中，震荡过夜，4℃条件下离心20分钟后，取上清，将饱和硫酸铵加入上清混合均匀至硫酸铵的终浓度为30％～60％，4℃下孵育1小时或者过夜；

所述硫酸铵的终浓度为50％；

所述抽提缓冲液的组成为500mM NaCl，8mM NaH₂PO₄，42mM Na₂HPO₄，2mM二硫苏糖醇，0.05％NaN₃，pH7.4；

所述缓冲液A的组成为22mM NaH₂PO₃，3mM Na₂HPO₃，2mM二硫苏糖醇，0.05％NaN₃，pH7.0；

所述缓冲液B的组成为2M NaCl，84mM Na₂HPO₄，16mM NaH₂PO₄，2mM二硫苏糖醇，0.05％NaN₃，pH7.5。