[发明专利]一种诱变筛选高产3-羟基丙酸菌株的方法

摘要

本发明公开了一种诱变筛选高产3‑羟基丙酸菌株的方法，包括步骤1、出发菌株的选择：选用假丝酵母变种作为出发菌株；步骤2、菌株的活化；步骤3、菌株的多重诱变：氯化锂诱变；紫外诱变；亚硝基胍诱变；步骤4、诱变菌株的筛选：将步骤3所得到的右边之后的菌悬液分别梯度稀释，取不同浓度的菌悬液200μL涂布至筛选培养基上，30‑40℃培养48‑72h，挑选透明圈与菌落直径比值较大的单菌落进行保存；步骤5、诱变菌株的复筛：将步骤4所筛选的诱变菌株涂布于基础培养基中，28‑33.2℃，恒温水浴震荡培养24‑36h。本发明以假丝酵母变种为出发菌株，复合诱变得到可稳定遗传的高产菌株，其生产量明显高于目前的报道，为微生物发酵生产3‑羟基丙酸工业化提供了可能。

主权项

1.一种诱变筛选高产3‑羟基丙酸菌株的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1、出发菌株的选择：选用假丝酵母变种作为出发菌株；步骤2、菌株的活化：将所述出发菌株接入活化培养基中，37℃，150‑165r/min摇床培养24‑36h，然后将培养液涂布到筛选培养基上，35‑42℃，培养36‑48h，挑取单菌落，重复活化操作，进行二次活化，得到二次活化的酵母菌液；步骤3、菌株的多重诱变：氯化锂诱变：分别配制氯化锂浓度为0%、O.3%、0.5%、0.7% .0.9%、和1%的活化培养基取1mL二次活化的酵母菌液分别接入不同浓度的氯化锂活化培养基中，35‑42℃，135r/min摇床培养24 h；紫外诱变：然后取菌悬液8mL置于直径9cm的培养皿中，在磁力搅拌下用15W紫外灯照射30s、60s、90s、120s；亚硝基胍诱变：称取亚硝基胍放入无菌离心管中，加入浓度为10¹¹个/mL的菌悬液，使亚硝基胍终浓度为0.5mg/mL，充分溶解后置于35‑38℃恒温振荡，作用时间分别为15min、25min、35min、45min；步骤4、诱变菌株的筛选：将步骤3所得到的右边之后的菌悬液分别梯度稀释至10^‑1、10^‑2、10^‑3、10^‑4、10^‑5、10^‑6后，取不同浓度的菌悬液200μL涂布至筛选培养基上， 30‑40℃培养48‑72h，挑选透明圈与菌落直径比值较大的单菌落进行保存；步骤5、诱变菌株的复筛：将步骤4所筛选的诱变菌株 涂布于基础培养基中，28‑33.2℃，恒温水浴震荡培养24‑36h，通过测定发酵液中丙酸的含量确定筛选的菌株。