[发明专利]一种简便、高效的大肠杆菌感受态细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201910013604.2 | 申请日： | 2019-01-08 |
| 公开（公告）号： | CN109852559A | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 邵继平 | 申请（专利权）人： | 海南医学院 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 571199 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种简便、高效的大肠杆菌感受态细胞的制备方法，包括下述步骤：从平板上挑取大肠杆菌单菌落于37℃，250rpm振荡培养12～16h；将培养过夜的3ml菌体转接到大瓶，30℃，225rpm振荡培养至OD600值为0.4~0.6；收集细菌沉淀，50ml冰水洗涤，回收菌体；加入预冷的缓冲液I，枪头反复吹打重悬菌体，冰浴30min；最后菌体用1ml预冷的缓冲液I重悬即得大肠杆菌感受态细胞。100μl/管分装在1.5ml EP管中，‑80℃保存备用。利用本发明制备的感受态细胞转化率高，且操作简便、成本低廉。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌感受态细胞 制备 振荡培养 缓冲液 预冷 大肠杆菌单菌落 感受态细胞 冰水洗涤 回收菌体 细菌沉淀 重悬菌体 吹打 冰浴 大瓶 分装 菌体 枪头 重悬 备用 保存 | ||
【主权项】：
1.一种简便、高效的大肠杆菌感受态细胞的制备方法，包括以下步骤：1)从平板上挑取一个新活化的大肠杆菌单菌落至3ml 2YT液体培养基的试管中，37℃，250rpm振荡培养12～16h；2)将培养过夜的3ml小量菌液转接到装有300ml 2YT液体培养基(添加葡萄糖)的1000ml三角瓶中，30℃，225rpm振荡培养至OD600值为0.4～0.6；3)将扩增的300ml大量菌液转移到预冷的50ml无菌离心管中，于室温以3650rpm离心5min，收集细菌沉淀，弃上清；4)50ml冰水洗细菌沉淀，随后于室温以3650rpm离心5min，收集细菌，弃上清；5)重复步骤4)一次；6)倒扣离心管于无菌吸水纸上5min，使液体流尽，回收菌体；7)加入20ml预冷的缓冲液I，枪头反复吹打均匀以重悬菌体，冰浴30min，随后于室温以3650rpm离心5min，回收菌体；8)用1ml预冷的缓冲液I重悬细菌，即得大肠杆菌感受态细胞。100μl/管分装在1.5ml EP管中，‑80℃保存备用；9)取一管上述大肠杆菌的感受态细胞，取25μl进行转化。
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