[发明专利]一种抗艾滋病药物阿扎那韦中间体的制备方法有效
| 申请号： | 201811645151.7 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109735553B | 公开（公告）日： | 2022-07-12 |
| 发明（设计）人： | 丁雪峰;钱明 | 申请（专利权）人： | 南京诺云生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N15/70;C12N9/04;C12P13/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京佰腾智信知识产权代理事务所(普通合伙) 32509 | 代理人： | 胡丽华 |
| 地址： | 210000 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种抗艾滋病药物阿扎那韦中间体的制备方法，属于医药生物技术领域，通过全基因合成的方法，对基因的二级结构以及密码子偏好性进行调整，设计引物长度，合成引物，并将获得的引物加双蒸水溶解后，加到如下的反应体系中，将配制好的PCR反应体系进行扩增，将PCR得到的DNA片段进行切胶纯化，挑取单克隆进行测序，测序成功的DNA序列为SEQ ID NO.1，命名为Sst‑1，其对应的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明反应条件温和，对设备要求低，生产过程无需高温或者冷却，能耗低，纯化方便，整个体系使用单酶催化，底物用量/NAD用量高达1540:1，辅酶循环次数高，且反应条件温和。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 艾滋病 药物 中间体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种抗艾滋病药物阿扎那韦中间体的制备方法，其特征在于，通过全基因合成的方法，对基因的二级结构以及密码子偏好性进行调整，以实现在大肠杆菌中的高表达；利用Primer Premier和OPTIMIZER进行设计，并保证Tm差异控制在3℃以内，引物长度控制在60base以内，得到以下引物：![]()
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合成上述引物，并将获得的引物加双蒸水溶解后，加到如下的反应体系中，使得各引物的终浓度为30nM，首尾引物的终浓度为0.6μM，将配制好的PCR反应体系置于博日XP cycler基因扩增仪中进行扩增，将PCR得到的DNA片段进行切胶纯化，利用同源重组的方法克隆进pET30a的NdeI/XhoI位点，挑取单克隆进行测序，测序成功的DNA序列为SEQ ID NO.1，命名为Sst‑1，其对应的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。
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