[发明专利]一种能快速定性检测猪瘟病毒的检测试剂的制备方法

摘要

本发明涉及检测试剂技术领域，且公开了一种能快速定性检测猪瘟病毒的检测试剂的制备方法，包括如下步骤：步骤一：提炼目的基因；步骤二：制备互补脱氧核糖核酸；步骤三：进行不对称的PCR扩增。该能快速定性检测猪瘟病毒的检测试剂的制备方法，具备能快速定性检测猪瘟病毒的优点。

主权项

1.一种能快速定性检测猪瘟病毒的检测试剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一：提炼目的基因S1.准备一头得了猪瘟的生猪，提炼生猪体内的PK‑15细胞；S2.将S1中得到的PK‑15细胞放置在冷冻室内以零下70°的温度进行冻融12‑26分钟，重复三次；S3.提取120μlPK‑15细胞和800μl的RNA裂解液放置在同一个搅拌罐内进行搅拌均匀，并且静置8‑12分钟；S4.在S3中拌匀的搅拌液中添加150μl的三氯甲烷，将其放入离心搅拌罐中以8500g/min的速度离心搅拌7‑13分钟；S5.提取S4中得到液体的上层部分，并将其放置在一个干净的试管内，并添加350μl的二甲基甲醇，静置沉淀5‑8min后再放入离心搅拌罐中以8500g/min的速率离心搅拌5min；S6.将S5中提取的液体放置在正常室温环境下自然晾干，再添加15μlDEPC处理过的水得到目标基因RNA；步骤二：制备互补脱氧核糖核酸S1.提取8μl步骤一中所得到的目标基因RNA；S2.在其中添加3μl的反向引物和2μl的三磷酸碱基脱氧核苷酸，在45°的温度下养育3min，再快速冷却2min得到互补脱氧核糖核酸；步骤三：进行不对称的PCR扩增S1.提取3μl步骤二中得到的互补脱氧核糖核酸；S2.将S1中得到的互补脱氧核糖核酸加入到80μl的不对称PCR体系中进行充分反应，先在95°的温度下预变性3min；92°的温度下变性20s，53°的温度下退火10s，70°的温度下延伸12s，重复扩增30‑60次；S4.将S2中重复扩增的产物在70°的温度下延伸8min；S5.得到最终检测试剂。