[发明专利]一种羊肚菌原生质体的制备方法在审
| 申请号： | 201811404287.9 | 申请日： | 2018-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN109468234A | 公开（公告）日： | 2019-03-15 |
| 发明（设计）人： | 刘士旺;楼坚;柳永;龚金炎;方若思;鲍文娜;楚秉泉;张亚青;翁倩 | 申请（专利权）人： | 浙江科技学院 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 杭州赛科专利代理事务所(普通合伙) 33230 | 代理人： | 陈俊波 |
| 地址： | 310023 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明属于真菌的生物学领域，具体公开了一种羊肚菌原生质体的制备方法，该制备方法包括如下步骤：S1、制备菌丝体培养基；S2、制备再生培养基；S3、培养菌丝体；S4、原生质体的制备；S5、原生质体纯化；S6、原生质体再生。本发明方法所述原生质体制备过程中以四氢吡啶为渗透压调节剂，谷胱甘肽为原生质体保护剂，在一个高渗的环境中加入复合酶进行破壁处理，起到双层协同保护原生质体免于膨胀破裂的作用，本发明方法，工艺简单，便于操作，可重复性强。 | ||
| 搜索关键词： | 原生质体 制备 羊肚菌 菌丝体培养基 渗透压调节剂 原生质体再生 生物学领域 原生质体制 再生培养基 谷胱甘肽 可重复性 破壁处理 四氢吡啶 保护剂 复合酶 菌丝体 真菌 破裂 协同 膨胀 | ||
【主权项】：
1.一种羊肚菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：S1、制备菌丝体培养基；S2、制备再生培养基；S3、培养菌丝体；将羊肚菌菌种接种于所述步骤S1获得的菌丝体培养基中，于20‑28℃，转速150‑180r/min下培养4‑6d至产生大量菌丝体，离心弃去上清液，得到菌丝体；S4、原生质体的制备：将所述S3步骤所获得的菌丝体加入渗透压稳定剂，洗涤2‑4次，加入复合酶液进行酶解，于30℃‑37℃下酶解1‑3h，酶解中不断搅拌混匀，充分释放原生质体；所述渗透压稳定剂是由CaCl2、四氢吡啶、谷胱甘肽和磷酸缓冲液组成的混合液体；S5、原生质体纯化：将所述步骤S4获得的原生质体进行纯化；S6、原生质体再生：将经纯化的原生质体加入渗透压稳定剂制成原生质体悬浮液，采用夹层法培养于再生培养基上，于20℃‑28℃条件下培养1‑3天，形成再生菌落。
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