[发明专利]一种用于检测碱性磷酸酶的荧光化学方法与应用

摘要

本发明公开了一种用于检测碱性磷酸酶的荧光化学方法与应用。该方法包括如下步骤：首先，设计一条3'端被磷酸化的单链DNA作为DNA探针，在ALP存在时，DNA探针的3'末端去磷酸化暴露出3'‑OH末端；然后，TdT在DNA探针的3'‑OH末端催化加成dTTPs使其延伸生成富含poly‑T序列的单链探针DNA，其与汞离子形成T‑HgII‑T结构介导的双链DNA，加入核酸染料后根据检测到的荧光强度信号与ALP的浓度绘制出检测曲线；最后将待测样品替换ALP，重复上述步骤，并将检测结果与检测曲线对照，即可计算出样品中ALP的含量。本发明方法简单方便，灵敏度高，可用于检测碱性磷酸酶或筛选碱性磷酸酶抑制剂。

主权项

1.一种用于检测碱性磷酸酶的荧光化学方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计一条3'端被磷酸化的单链DNA作为DNA探针；(2)将不同终浓度的ALP分别与步骤(1)中的DNA探针以及缓冲溶液混合，得到混合溶液I；然后将混合溶液I进行孵育，使探针DNA的3'末端去磷酸化暴露出3'‑OH末端，得到去磷酸化后的DNA探针溶液；(3)将dTTPs、TdT、CoCl2和缓冲液加入到步骤(2)中得到的去磷酸化后的DNA探针中，得到混合溶液II；然后将混合溶液II进行孵育，得到富含poly‑T序列的单链探针DNA溶液；(4)将汞盐加入到步骤(3)中得到的富含poly‑T序列的单链探针DNA中进行孵育，得到T‑HgII‑T结构介导的双链DNA溶液；(5)将核酸染料加入到步骤(d)中得到的T‑HgII‑T结构介导的双链DNA中，得到混合溶液III；然后检测混合溶液III的荧光强度信号，记为F；同时，以步骤(2)中不添加ALP为对照，检测其荧光强度信号，记为F0；再根据荧光信号增强倍数F/F0与ALP的终浓度绘制检测曲线；(6)将待测样品替换步骤(2)中的ALP，重复步骤(2)～(5)，然后将检测结果与步骤(5)中得到的ALP检测曲线对照，计算出待测样品中ALP的含量。