[发明专利]一种紫苏抗肿瘤多肽及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种紫苏抗肿瘤多肽及其制备方法和应用，紫苏籽低温压榨脱油后将紫苏饼粕捣碎后置于索氏提取的纸筒中，采用石油醚于50℃回流去除残油，待浸出的石油醚为无色时停止加热，冷却至室温后将脱脂后的紫苏饼粕倒出，用粉碎机粉碎后过60目筛子，得脱脂紫苏粉；采用超声波辅助碱溶酸沉法从脱脂紫苏粉中分离提取紫苏蛋白；对紫苏抗肿瘤多肽的分离纯化，收集洗脱峰，冷冻干燥得紫苏抗肿瘤多肽。本发明制得紫苏抗肿瘤多肽表明对人肝癌细胞HepG2的增殖具有较强的抑制作用，当浓度达到100μg/mL时，其抑制率达到了90％以上，基本接近抗癌药紫杉醇的抑制效果。紫苏抗肿瘤多肽来源于天然植物紫苏，对人体无毒无副作用，因此可作为抗癌药物做临床应用研究。

主权项

1.一种紫苏抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1、收集成熟的紫苏籽，去除杂质，低温压榨脱油后将紫苏饼粕捣碎，取捣碎后的紫苏饼粕置于索氏提取的纸筒中，采用石油醚于50℃回流去除残油，待浸出的石油醚为无色时停止加热，冷却至室温后将脱脂后的紫苏饼粕倒出，用粉碎机粉碎后过60目筛子，得脱脂紫苏粉；Step2、用蒸馏水将脱脂紫苏粉浸泡溶胀，调节料液比1:10，pH值为9，在超声波作用下使脱脂紫苏粉中的蛋白质充分溶解，超声功率200W，超声时间32min，然后在5000rpm下离心5min收集上清液，用稀盐酸调节上清液的pH为3～4，达到蛋白的等电点，离心收集沉淀，将沉淀用水清洗2次，调节pH至中性，经冷冻干燥后得紫苏分离蛋白；Step3、采用碱性蛋白酶Alcalase对紫苏分离蛋白进行酶解，酶解工艺条件为：底物质量浓度30g/L，pH9.5，酶解温度60℃，碱性蛋白酶Alcalase用量为step2获得的紫苏分离蛋白重量的7％，酶解时间4h，酶解结束后100℃水浴灭活5min，5000rpm离心5min后取上清，即为紫苏蛋白酶解产物；Step4、使用装有截留分子量为3kDa超滤膜的AmiconUltra‑15离心超滤管对紫苏蛋白酶解产物进行分离，离心机转速为8000rpm，离心时间25min，收集超滤液；Step5、采用Biotage快速制备液相色谱全自动纯化系统对超滤液分离纯化，色谱柱为SephadexG‑15，洗脱液为0.1mol/L的NaCl，流速1mL/min，检测波长280nm，收集洗脱峰3，冷冻干燥得紫苏抗肿瘤多肽。