[发明专利]一种支气管肺病灶灌洗液的SHOX2甲基化检测方法

摘要

本发明公开了一种支气管肺病灶灌洗液的SHOX2甲基化检测方法，其技术方案要点是：将患者支气管肺病灶处采集的灌洗液等量分为3份，作为3个样本；将S1中的3个样本分别应用DNA提取试剂盒提取DNA，应用UV分光光度计测定DNA浓度及纯度，取浓度大于7ng/ul且OD260/280吸光光度比值为1.8‑1.9为合格样本；利用亚硫酸氢盐转化，将所述S2中合格的样本进行亚硫酸氢盐转化；对所述S3中的样本进行实时荧光定量PCR，并以内参基因β‑actin作为阳性对照，实验时采用20ul PCR反应体系，支气管肺病灶灌洗液的SHOX2甲基化检测方法检测简单、可靠性强。

主权项

1.一种支气管肺病灶灌洗液的SHOX2甲基化检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将患者支气管肺病灶处采集的灌洗液等量分为3份，作为3个样本；S2、将S1中的3个样本分别应用DNA提取试剂盒提取DNA，应用UV分光光度计测定DNA浓度及纯度，取浓度大于7ng/ul且OD260/280吸光光度比值为1.8‑1.9为合格样本；S3、亚硫酸氢盐转化，将所述S2中合格的样本进行亚硫酸氢盐转化；S4、对所述S3中的样本进行实时荧光定量PCR，并以内参基因β‑actin作为阳性对照，实验时采用20ul PCR反应体系；S5、对所述S4中的样本进行实时荧光定量PCR仪扩增，PCR反应条件为98℃/10″，并进行60个循环；S6、在阳性对照、阴性对照、空白对照有效的情况下，测量绘制样本中β‑actin和SHOX2基因的指数扩张曲线；S7、若所述S6中样本中β‑actin和SHOX2基因均有指数扩张曲线则判断为甲基化阳性，若样本中β‑actin有指数扩增曲线，而SHOX2基因无扩增曲线则为甲基化阴性。