[发明专利]一种温郁金凝集素粗品、纯品、PGRP菌株混合物的制备方法及温郁金肥料有效
| 申请号： | 201811250240.1 | 申请日： | 2018-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN109553672B | 公开（公告）日： | 2021-04-23 |
| 发明（设计）人： | 姜程曦;袁玮;赵祺;任仙樱;鲍康德;秦宇雯;李帆;张金华;郭月琴;罗莎;洪涛 | 申请（专利权）人： | 温州大学 |
| 主分类号： | C07K14/42 | 分类号： | C07K14/42;C07K1/30;C07K1/14;C12N1/20;C05F11/08 |
| 代理公司： | 温州名创知识产权代理有限公司 33258 | 代理人： | 陈加利 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市瓯*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明涉及一种温郁金凝集素粗品、纯品、PGRP菌株混合物的制备方法及温郁金肥料，本发明依次通过打浆、酶解、脱脂、硫酸铵沉淀、透析、冷冻干燥得到活性较大的温郁金凝集素粗品，并通过温郁金凝集素与特异性PGRP菌株之间的凝集作用实现温郁金凝集素与特异性PGRP菌株的纯化，所得到的特异性PGRP菌株混合物可用于温郁金增产。本发明所提供的分离方法，所得到的温郁金凝集素粗品活性较大，通过温郁金凝集素粗品制备的温郁金特异性PGRP菌株混合物用于温郁金培育，可以使温郁金明显增产，制备过程简单，成本低，便于产业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 郁金 凝集素 纯品 pgrp 菌株 混合物 制备 方法 肥料 | ||
【主权项】：
1.一种温郁金凝集素粗品的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：取新鲜的温郁金，切片，粉碎打浆，得到浆状原料，在0‑8℃、8000 ‑10000r/min下离心20‑45 min，弃上清液，得第一次沉淀物；在pH为5.5~6.5的缓冲溶液中中加入1~3%的复合酶溶液，所述复合酶溶液为纤维素酶:果胶酶=2‑3:1，与第一次沉淀物以体积比5‑7:1混合，混合后在常温下，低速搅拌4‑6h，然后在0‑8℃、2000 r/min下离心10‑15 min，取上清液，然后在0‑8℃、8000 ‑10000 r/min下离心20‑45 min，弃上清液，得第二次沉淀物；在第二次沉淀物中按1:1‑2的体积比加入预冷石油醚，在0‑8℃下，低速搅拌10‑30min，抽滤，按1:0.5‑1的体积比加入预冷丙酮，静置1‑2min，抽滤，晾干，得第三次沉淀物；在第三次沉淀物中按1:8‑10的体积比加入PH为5.5‑6.5的缓冲液，在0‑8℃下，低速搅拌2‑4h，在0‑8℃、8000‑10000 r/min下离心20‑45 min，弃沉淀物，按1:0.1‑0.3的体积比在上清液中加入饱和硫酸铵，在0‑8℃下，低速搅拌1‑2min，在0‑8℃、2000‑3000 r/min下离心2‑4 min，弃沉淀物，按1：2.5‑2.9的体积比在上清液中加入饱和硫酸铵，在0‑8℃下，低速搅拌3‑5min，在0‑8℃、8000 ‑10000 r/min下离心25‑35min，得到第四次沉淀物；将第四次沉淀物溶于水中，置于透析袋中进行透析至透析液中无硫酸根，冷冻干燥得到温郁金凝集素粗品。
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- 2013-07-03 - 2013-09-18 - C07K14/42
- 本发明公开了一种醛化血细胞纯化花生种子中凝集素的方法，其特征在于：将制得的花生粉经石油醚脱脂处理之后，与醛化后血细胞混合、偶联，经洗脱、冷冻干燥得到凝集素。本发明利用醛化后血细胞对花生种子中凝集素进行特异性吸附，再利用乳糖对凝集素的特异结合能力进行洗脱，从而达到凝集素纯化的目的，本方法具有经济、简便、条件温和且回收率高的优点，符合高通量、大规模纯化需要。
- 植物抗病相关蛋白GbMBL1及其编码基因和应用-201210034394.3
- 王付欣;王海云;仲乃琴;夏桂先 - 中国科学院微生物研究所
- 2012-02-16 - 2013-08-21 - C07K14/42
- 本发明公开了一种植物抗病相关蛋白GbMBL1及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，命名为GbMBL1蛋白，来源于海岛棉(Gossypium barbadense)，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病相关的由序列1衍生的蛋白质。本发明提供的蛋白及其编码基因可用于培育抗病植物新品种，在植物的抗黄萎病分子育种方面具有重要的应用价值。
- 微波辅助反胶束分离纯化芸豆凝集素的方法-201310056397.1
- 马莺;何述栋;李琳;何胜华;王超 - 哈尔滨工业大学
- 2013-02-22 - 2013-05-01 - C07K14/42
- 微波辅助反胶束分离纯化芸豆凝集素的方法，涉及一种凝集素的分离纯化方法。为了解决芸豆凝集素分离纯化倍率低、成本高、工艺多、时间长的问题，本发明提出的微波辅助反胶束分离纯化芸豆凝集素的方法为直接从芸豆凝集素水提液中分离纯化凝集素，包括前萃取过程和反萃取过程。本发明在微波辅助作用下，使芸豆中水溶性蛋白迅速溶入水提液，大大提高了溶解度，缩短了浸提时间。本发明基于液-液萃取原理，提高了萃取的选择性，可实现芸豆凝集素的高效前萃取和反萃取。应用反胶束萃取技术只需前萃取和反萃取两步即可达到较好的分离纯化效果，步骤简单，操作方便，与微波辅助集合可极大缩短前处理时间，节约成本。
- 一种半夏凝集素蛋白的提取方法-201210340208.9
- 薛建平;杜圣艳;赵伟;盛玮;李进步;历雪英 - 安徽省淮北市农药厂
- 2012-09-14 - 2013-03-27 - C07K14/42
- 本发明公开了一种半夏凝集素蛋白的提取方法，将绞碎的宿半夏块茎加入到半夏蛋白提取剂中，4℃左右的低温下高速离心，所得去杂后的半夏总蛋白加入饱和度为20%-90%的硫酸铵溶液中去，充分的混匀沉淀后，将其置于低温高速离心机中6000rad·min-1左右离心20min左右，后将得到的蛋白质溶液超滤，透析，过葡聚糖凝胶柱，分离纯化得到半夏凝集素蛋白，冷冻真空干燥得半夏凝集素蛋白粉末。本发明经过大量的实验研究，获得了高效提取半夏蛋白的工艺技术，应用于制造环保的安全的价格低廉的半夏蛋白添加产品。
- 与植物抗蚜虫能力相关的蛋白及其编码基因与应用-201110236588.7
- 王志兴;苗猛猛;王旭静;唐巧玲 - 中国农业科学院生物技术研究所
- 2011-08-17 - 2013-03-06 - C07K14/42
- 本发明公开了与植物抗蚜虫能力相关的蛋白及其编码基因与应用。本发明提供了一种与植物抗蚜虫能力相关的蛋白。本发明所提供的与植物抗蚜虫能力相关的蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与抗蚜虫相关的由(a)衍生的蛋白质。本发明将包含Amlec基因的重组植物表达载体通过农杆菌介导法导入烟草，获得了转基因烟草对转基因烟草进行蚜虫抗性鉴定，发现转基因烟草与对照烟草相比，对蚜虫的抗性明显提高，对蚜虫种群的平均抑制率为35.5％。
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