[发明专利]一种醛化血细胞纯化花生种子中凝集素的方法有效
| 申请号： | 201310276043.8 | 申请日： | 2013-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN103304654A | 公开（公告）日： | 2013-09-18 |
| 发明（设计）人： | 孙杰;朱凤;杨庆利;于丽娜;毕洁;张初署 | 申请（专利权）人： | 山东省花生研究所 |
| 主分类号： | C07K14/42 | 分类号： | C07K14/42;C07K1/22 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266607 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种醛化血细胞纯化花生种子中凝集素的方法，其特征在于：将制得的花生粉经石油醚脱脂处理之后，与醛化后血细胞混合、偶联，经洗脱、冷冻干燥得到凝集素。本发明利用醛化后血细胞对花生种子中凝集素进行特异性吸附，再利用乳糖对凝集素的特异结合能力进行洗脱，从而达到凝集素纯化的目的，本方法具有经济、简便、条件温和且回收率高的优点，符合高通量、大规模纯化需要。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 血细胞 纯化 花生 种子 凝集素 方法 | ||
【主权项】：
一种醛化血细胞纯化花生种子中凝集素的方法，其特征在于：将制得的花生粉经石油醚脱脂处理之后，与醛化后血细胞混合、偶联，经洗脱、冷冻干燥得到凝集素；其具体步骤如下：一、将新鲜的血液加入抗凝剂，用两倍体积的灭菌磷酸缓冲液重悬，2000转离心5分钟，再用灭菌磷酸缓冲液重悬2‑3次，最后将血细胞的比容稀释为0.05备用；二、步骤一中得到的0.05血细胞取10倍体积与1倍体积的neuraminidase混合反应后，用灭菌磷酸缓冲液洗涤3‑4次，重悬为比容0.2‑0.4的酶处理血细胞；三、步骤二中得到的0.2‑0.4酶处理血细胞取4倍体积与1倍体积的醛化剂反应后，用灭菌磷酸缓冲液洗涤3‑4次，将血细胞用灭菌磷酸缓冲液稀释为比容0.4‑0.6的醛化血细胞备用;四、将花生晒干、粉碎，加入石油醚中，恒温水浴振荡处理，抽滤，弃滤液，保留花生粉滤渣，并置于通风橱中晾干；五、将步骤四中得到的花生粉滤渣中加入5倍体积的灭菌磷酸缓冲液，混匀溶解后以10000转超速离心20 min，弃沉淀，保留上清液，得到花生凝集素粗提液;六、将步骤五中得到的花生凝集素粗提液与步骤三中得到的醛化血细胞按照1:1‑1:3的比例混合，反应30‑60 min，期间摇动混合液2‑3次；七、上述混合液2000转离心5 min，弃上清液，沉淀中加入含有200mm乳糖的灭菌磷酸缓冲液洗脱之后离心，上清浓缩、冻干得到花生凝集素纯品。
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