[发明专利]一种鳗弧菌鞭毛蛋白基因敲除的方法有效
| 申请号： | 201811210295.X | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109517844B | 公开（公告）日： | 2021-04-30 |
| 发明（设计）人： | 高权新;彭士明;闵明华;岳彦峰 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所;湖州师范学院生命科学学院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N1/21;C12R1/63 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所(普通合伙) 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种鳗弧菌鞭毛蛋白基因敲除的方法，利用交叠PCR技术获得了上下游同源臂的融合片段，采用混合孵育的方式完成了重组质粒的转化，并利用二次同源重组技术有效敲除了鳗弧菌的鞭毛蛋白FlaB。本发明简单易行，极大的提高了基因敲除的效率，为鳗弧菌的基因敲除提供了技术支持，同时也为鞭毛蛋白的生物学功能研究提供新的思路。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 弧菌 鞭毛 蛋白 基因 方法 | ||
【主权项】：
1.一种鳗弧菌鞭毛蛋白基因敲除的方法，包括：(1)采用交叠PCR技术获得鞭毛蛋白FlaB上下游同源臂的融合片段；(2)利用重组酶Exnase II将融合片段与自杀载体pLP12进行重组，构建重组自杀质粒pLP12‑FlaB；(3)以大肠杆菌β2163作为重组自杀质粒的供体菌，以鳗弧菌作为受体菌，采用混合孵育完成重组自杀质粒pLP12‑FlaB的转化；(4)运用二次同源重组技术敲除鳗弧菌的FlaB基因，即可。
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