[发明专利]一种酪氨酸酚裂解酶发酵过程中的诱导表达方法有效

专利信息
申请号: 201811146156.5 申请日: 2018-09-29
公开(公告)号: CN109112122B 公开(公告)日: 2021-10-22
发明(设计)人: 金伟;郑长春;王博;慕东;朱维忠;卢春玲;田晓梅;戴晓燕 申请(专利权)人: 山东鲁抗医药股份有限公司
主分类号: C12N9/88 分类号: C12N9/88
代理公司: 北京高沃律师事务所 11569 代理人: 刘奇
地址: 272000 山*** 国省代码: 山东;37
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摘要: 发明提供了一种酪氨酸酚裂解酶发酵过程中的诱导表达方法,属于生物发酵技术领域。本发明提供的方法先在36~38℃条件下发酵培养菌株至OD600=25~30,得到待诱导发酵液;然后将所述待诱导发酵液分阶段降温和添加诱导剂,结合溶氧水平的变化观察菌体适应情况,待溶氧量稳定后,得到最终诱导发酵液,维持发酵状态至发酵结束。按本发明提供的方法对菌体进行诱导,能最大限度地降低诱导剂对菌体的毒害,有效解决菌体对低温和诱导剂的适应性差的问题。发酵结束后菌体OD600不低于100,菌体湿重达到180g/L以上,发酵液中酪氨酸酚裂解酶的表达量大于15g/L。
搜索关键词: 一种 酪氨酸 裂解 发酵 过程 中的 诱导 表达 方法
【主权项】:
1.一种酪氨酸酚裂解酶发酵过程中的诱导表达方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)在36~38℃条件下发酵培养菌株至OD600=25~30,得到待诱导发酵液;(2)将所述待诱导发酵液降温至31~33℃,待溶氧量稳定至25~35%,得到初步诱导发酵液;(3)将所述初步诱导发酵液降温至25~27℃,加入IPTG诱导剂至终浓度为0.065~0.085mmol/L,待溶氧量稳定至25~35%,得到二次诱导发酵液;(4)将所述二次诱导发酵液降温至19~21℃,加入IPTG诱导剂至终浓度为0.14~0.16mmol/L,待溶氧量稳定至25~35%,得到最终诱导发酵液,维持发酵状态至菌株的OD600不增加结束发酵。
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