[发明专利]通过多条sgRNA共注射实现同一基因有效敲除有效
| 申请号： | 201811113109.0 | 申请日： | 2018-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN109234316B | 公开（公告）日： | 2021-02-09 |
| 发明（设计）人： | 黄行许;王新;贾堃 | 申请（专利权）人： | 肇庆华夏凯奇生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/89;C12N9/22 |
| 代理公司： | 北京迎硕知识产权代理事务所(普通合伙) 11512 | 代理人： | 张群峰;钱扬保 |
| 地址： | 526238 广东省肇庆市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 通过多条sgRNA共注射实现同一基因有效敲除。敲除方法包括：选定待敲除基因的编码区的至少两个目标序列，使其分别包含完整的目标密码子CAA、CAG或CGA；利用至少两个sgRNA序列来将BE3定位到相应的目标序列以使目标密码子中的目标单碱基C变成T从而相应引入终止密码子TAA或TAG、TGA以实现基因敲除；所述至少两个sgRNA序列为分别与所述至少两个目标序列互补对应的序列，其中所述至少两个sgRNA被共注射以实现同一基因的有效敲除。本发明提供了一种更高效，且具有高精确性和低脱靶效应的基因敲除方法。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 sgrna 注射 实现 同一 基因 有效 | ||
【主权项】：
1.一种基因敲除方法，包括：选定待敲除基因的编码区的至少两个19～21bp‑NGG目标序列，使其分别包含完整的目标密码子CAA、CAG或CGA，其中的目标单碱基C位于目标序列的第4‑8位，目标密码子与NGG间隔12‑14bp；利用至少两个sgRNA序列来将BE3定位到相应的目标序列以使目标密码子中的目标单碱基C变成T从而相应引入终止密码子TAA或TAG、TGA以实现基因敲除；所述至少两个sgRNA序列为分别与所述至少两个目标序列互补对应的19～21bp序列，其中所述至少两个sgRNA被共注射以实现同一基因的有效敲除。
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