[发明专利]一种中华鳖基因组微卫星多重PCR体系构建方法

摘要

本发明公开了一种使用公共数据，快速构建中华鳖10×以上多重PCR体系的技术方法，其主要特征在于：1)使用公共数据库，获取中华鳖基因组序列；2)使用MISA软件对中华鳖基因组序列进行分析，使用Primer 3进行批量引物设计，使用使用AutoDimer软件计算多态位点引物序列的相容性；3)保留引物序列相容性最强的10‑12个位点构建多重PCR体系，按照每个位点上游引物0.4μM，下游引物10μM的浓度配制引物预混液，然后将全部位点的引物预混液等体积混合配制多重PCR引物工作液；4)使用常规PCR方法对多重PCR体系进行扩增，使用毛细管电泳对扩增产物进行基因分型。本发明构建的多重PCR体系，标记通量高，基因分型结果准确、快速，可为中华鳖遗传育种等研究工作提供分子工具。

主权项

1.一种使用公共数据，快速构建中华鳖10×以上多重PCR体系的技术方法，其特征在于包括如下步骤：1)使用公共数据库，获取中华鳖基因组序列；2)分析中华鳖基因组序列，获取中华鳖微卫星位点信息；3)对全部微卫星位点进行引物设计；4)将全部位点按照产物大小进行区间分组，从每组中随机选取10‑15个标记/套多重PCR体系合成引物；5)验证每个位点的多态性，剔除产物不能扩增及PCR产物无多态性的位点6)计算多态位点组内和组间引物的序列相容性，保留序列相容性最强的10‑12个位点；7)为每组中每个位点的上游引物标记一种不同颜色的荧光；8)按照每个位点上游引物0.4μM，下游引物10μM的浓度配制引物预混液，将全部位点的引物预混液等体积混合配制多重PCR引物工作液，构建微卫星多重PCR反应体系；9)使用常规PCR方法对多重PCR体系进行扩增，使用毛细管电泳对扩增产物进行基因分型。