[发明专利]一种血液样本中鸟氨酸的检测方法

摘要

本发明涉及一种血液样本中鸟氨酸的检测方法，采用液相‑质谱联用系统对鸟氨酸进行分析；包括步骤：(1)确定LC‑MS/MS条件；(2)将鸟氨酸溶于甲醇中，稀释制成鸟氨酸浓度为3～300μg/mL的标准溶液，再加入基质替代溶液PBS溶液，制成鸟氨酸浓度为0.3～30μg/mL的标准曲线样品；将标准曲线样品通过前处理后进行检测并绘制鸟氨酸的标准曲线；(3)步骤三：样品检测，将待测血液样本通过前处理后进行检测，将检测结果与标准曲线对照计算出待测血液样本中鸟氨酸的含量；本发明的检测方法克服了现有技术中的检测方法无法实现鸟氨酸在体内较低浓度水平的精准定量检测的缺陷，有着精准度高、操作简单、分析快速的优点。

主权项

1.一种血液样本中鸟氨酸的检测方法，其特征在于：采用液相‑质谱联用系统对鸟氨酸进行分析；检测方法包括以下步骤：步骤一：确定LC‑MS/MS条件：LC条件如下：流动相：流动相A：5mM乙酸铵水溶液，所述乙酸铵水溶液中含质量百分比为0.1％甲酸；流动相B：质量百分比为0.1％的甲酸乙腈；梯度洗脱条件包括如下三个阶段：第一阶段：起始流动相比例：A:B＝99:1；第二阶段：流动相比例：A:B＝80:20；第三阶段：流动相比例：A:B＝99:1，至结束；且第一阶段和第三阶段的洗脱时间之和大于或等于1.5min；流速：1.2mL/min；进样量：2μL；自动进样器洗针程序：Rinse Mode:Before and after aspiration；Rinse Volume:200μL；Rinse Speed:35μL/sec；MS条件如下：检测方式：多反应监测MRM；离子源：APCI；扫描方式：正离子扫描；离子喷雾电压：5500V；气帘气：20Psi；Gas1：50Psi；NC：3.0MA；离子源温度：500℃；碰撞气种类：N2；碰撞气压力：Medium；内标：L‑鸟氨酸‑d6；步骤二：绘制标准曲线：将鸟氨酸溶于甲醇中，稀释制成鸟氨酸浓度为3～300μg/mL的标准溶液，再加入基质替代溶液PBS溶液，制成鸟氨酸浓度为0.3～30μg/mL的标准曲线样品；将标准曲线样品通过前处理后，以所述LC‑MS/MS条件分别检测标准曲线样品，并根据检测结果绘制鸟氨酸的标准曲线；步骤三：样品检测：将待测血液样本通过前处理后，以所述LC‑MS/MS条件进行检测，并将检测结果与所述标准曲线对照，计算出待测血液样本中鸟氨酸的含量；步骤二中标准曲线样品的前处理包括如下步骤：在鸟氨酸标准曲线样品中加入100μLPBS溶液和200μL内标溶液后涡旋1min，取上清液75μL与75μL纯水混合后进样分析，所述内标溶液为25ng/mL的L‑鸟氨酸‑d6乙腈溶液；步骤三中，待测血液样品的前处理包括如下步骤：在待测血液样品中加入100μL PBS溶液和200μL内标溶液后涡旋1min，取上清液75μL与75μL纯水混合后进样分析，待测血液样品为50μL血浆样品和5μL纯水的混合物，所述内标溶液为25ng/mL的L‑鸟氨酸‑d6乙腈溶液。