[发明专利]一种血液样本中鸟氨酸的检测方法

权利要求书

1.一种血液样本中鸟氨酸的检测方法，其特征在于：采用液相-质谱联用系统对鸟氨酸进行分析；检测方法包括以下步骤：

步骤一：确定LC-MS/MS条件：

LC条件如下：

流动相：流动相A：5mM乙酸铵水溶液，所述乙酸铵水溶液中含质量百分比为0.1％甲酸；流动相B：质量百分比为0.1％的甲酸乙腈；

梯度洗脱条件包括如下三个阶段：

第一阶段：起始流动相比例：A:B＝99:1；

第二阶段：流动相比例：A:B＝80:20；

第三阶段：流动相比例：A:B＝99:1，至结束；

且第一阶段和第三阶段的洗脱时间之和大于或等于1.5min；

流速：1.2mL/min；

进样量：2μL；

自动进样器洗针程序：Rinse Mode:Before and after aspiration；

Rinse Volume:200μL；

Rinse Speed:35μL/sec；

MS条件如下：

检测方式：多反应监测MRM；

离子源：APCI；

扫描方式：正离子扫描；

离子喷雾电压：5500V；

气帘气：20Psi；

Gas1：50Psi；

NC：3.0MA；

离子源温度：500℃；

碰撞气种类：N2；

碰撞气压力：Medium；

内标：L-鸟氨酸-d6；

步骤二：绘制标准曲线：

将鸟氨酸溶于甲醇中，稀释制成鸟氨酸浓度为3～300μg/mL的标准溶液，再加入基质替代溶液PBS溶液，制成鸟氨酸浓度为0.3～30μg/mL的标准曲线样品；

将标准曲线样品通过前处理后，以所述LC-MS/MS条件分别检测标准曲线样品，并根据检测结果绘制鸟氨酸的标准曲线；

步骤三：样品检测：

将待测血液样本通过前处理后，以所述LC-MS/MS条件进行检测，并将检测结果与所述标准曲线对照，计算出待测血液样本中鸟氨酸的含量；

步骤二中标准曲线样品的前处理包括如下步骤：在鸟氨酸标准曲线样品中加入100μLPBS溶液和200μL内标溶液后涡旋1min，取上清液75μL与75μL纯水混合后进样分析，所述内标溶液为25ng/mL的L-鸟氨酸-d6乙腈溶液；

步骤三中，待测血液样品的前处理包括如下步骤：在待测血液样品中加入100μL PBS溶液和200μL内标溶液后涡旋1min，取上清液75μL与75μL纯水混合后进样分析，待测血液样品为50μL血浆样品和5μL纯水的混合物，所述内标溶液为25ng/mL的L-鸟氨酸-d6乙腈溶液。

2.根据权利要求1所述的血液样本中鸟氨酸的检测方法，其特征在于：步骤一中所述的LC条件中，使用的高效液相色谱仪的型号为Agilent 1100、Agilent 1200、Agilent 1260、Agilent 1290、岛津LC-20A和岛津LC-30A中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的血液样本中鸟氨酸的检测方法，其特征在于：步骤一中所述的LC条件中，液相色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18、Agilent ZORBAX EclipsePlus-C18、Agilent ZORBAX SB-C18、Waters SunFire C18、AgelaVenusil XBP C18和Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的血液样本中鸟氨酸的检测方法，其特征在于：步骤一中所述的LC条件中，梯度洗脱条件为：

起始流动相比例：A:B＝99:1；

步骤①：0～1.50min，A:B＝99:1；

步骤②：1.50～3.5min，流动相比例由A:B＝99:1匀速上升至A:B＝20:80；

步骤③：3.50～4.25min，A:B＝20:80；

步骤④：4.25～4.30min，流动相比例由A:B＝20:80匀速下降至A:B＝99:1；

步骤⑤：4.30～5.00min，A:B＝99:1；

其中步骤①和步骤⑤的洗脱时间之和大于1.5min。