[发明专利]一种血液样本中鸟氨酸的检测方法

说明书

本发明涉及一种血液样本中鸟氨酸的检测方法，采用液相‑质谱联用系统对鸟氨酸进行分析；包括步骤：(1)确定LC‑MS/MS条件；(2)将鸟氨酸溶于甲醇中，稀释制成鸟氨酸浓度为3～300μg/mL的标准溶液，再加入基质替代溶液PBS溶液，制成鸟氨酸浓度为0.3～30μg/mL的标准曲线样品；将标准曲线样品通过前处理后进行检测并绘制鸟氨酸的标准曲线；(3)步骤三：样品检测，将待测血液样本通过前处理后进行检测，将检测结果与标准曲线对照计算出待测血液样本中鸟氨酸的含量；本发明的检测方法克服了现有技术中的检测方法无法实现鸟氨酸在体内较低浓度水平的精准定量检测的缺陷，有着精准度高、操作简单、分析快速的优点。

技术领域

本发明涉及医学检测领域，尤其涉及一种血液样本中鸟氨酸的检测方法。

背景技术

鸟氨酸(ornithine，化学式H₂N-CH₂-CH₂-CH₂-CH-NH₂-COOH)，是一种碱性氨基酸。虽在蛋白质中不能找到，但存在于短杆菌酪肽、短杆菌肽S等的抗菌性肽中，另外从深山紫堇根中发现了δ-N-乙酰鸟氨酸，是由精氨酸为碱或精氨酸酶作用分解生成。在生物体内，鸟氨酸主要参与尿酸循环，对于体内氨态氮的排出有重要作用。鸟氨酸在医药上除作为试剂与注射液外，通常与精氨酸一起用于配置恢复疲劳的发泡饮料。近年来，鸟氨酸在食品工业和医药工业上的应用日益广泛。

目前，当鸟氨酸在体内浓度较低时，现有的鸟氨酸检测方法无法进行精准定量检测。因此，研究一种操作简单、分析快速且能满足鸟氨酸在体内较低浓度水平的精准定量的检测方法显得尤为重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是设计一种操作简单、分析快速的血液样本中鸟氨酸的检测方法，解决现有的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明的血液样本中鸟氨酸的检测方法采用液相-质谱联用系统(LC-MS/MS)对鸟氨酸进行分析；检测方法包括以下步骤：

步骤一：确定LC-MS/MS条件：

LC条件如下：

流动相：流动相A：5mM乙酸铵水溶液，所述乙酸铵水溶液中含质量百分比为0.1％甲酸；流动相B：质量百分比为0.1％甲酸乙腈；

梯度洗脱条件包括如下三个阶段：

第一阶段：起始流动相比例：A:B＝99:1；

第二阶段：流动相比例：A:B＝80:20；

第三阶段：流动相比例：A:B＝99:1，至结束；

且第一阶段和第三阶段的洗脱时间之和大于或等于1.5min；

流速：1.2mL/min；

进样量：2μL；

自动进样器洗针程序：Rinse Mode:Before and after aspiration；

Rinse Volume:200μL；

Rinse Speed:35μL/sec；

MS条件如下：

检测方式：多反应监测MRM；

离子源：APCI；

扫描方式：正离子扫描；

离子喷雾电压：5500V；

气帘气：20Psi；

Gas1：50Psi；

NC：3.0MA；

离子源温度：500℃；