[发明专利]METTL3基因敲除的细胞系及其构建方法与干扰载体有效
| 申请号： | 201810733097.5 | 申请日： | 2018-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN108929863B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 宗鑫;汪以真;赵婧 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12R1/91 |
| 代理公司： | 33200 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 林松海<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种METTL3基因敲除的细胞系及其构建方法与干扰载体。METTL3基因敲除的细胞系，利用m6A甲基转移酶基因Mettl3在通过基因编辑方法获得耐受LPS刺激导致脂肪酸吸收障碍的猪肠道上皮细胞系。一种耐受LPS刺激导致脂肪酸吸收障碍的猪肠道上皮细胞系。一种针对猪源m6A甲基转移酶基因Mettl3的基因干扰载体。本发明公开了Mettl3基因的一种新功能，参与调控肠道上皮细胞脂肪酸吸收转运，并提供了通过基因编辑手段改善LPS刺激导致的脂肪酸吸收障碍的方法。本发明不仅为研究Mettl3在脂肪酸吸收过程中的作用奠定基础，还利用基因编辑的方法改善了LPS刺激导致的脂肪酸吸收障碍。 | ||
| 搜索关键词： | 脂肪酸吸收 基因敲除 甲基转移酶基因 上皮细胞系 干扰载体 猪肠道 构建 耐受 基因 肠道上皮细胞 基因干扰 利用基因 新功能 猪源 转运 调控 研究 | ||
【主权项】：
1.一种METTL3基因敲除的细胞系的构建方法，其特征在于，利用m6A甲基转移酶基因Mettl3在通过基因敲除方法获得耐受LPS刺激导致脂肪酸吸收障碍的猪肠道上皮细胞系；/n包括以下步骤：/n1）根据所述的m6A甲基转移酶基因Mettl3设计shRNA，/n所述的Mettl3序列如SEQ ID NO.1所示，所述的shRNA序列如SEQ ID NO.2，SEQ IDNO.3所示；/n2）针对m6A甲基转移酶基因Mettl3 shRNA进行磷酸化；/n3）将磷酸化的Mettl3 shRNA连接到慢病毒表达载体获得Mettl3 shRNA慢病毒表达载体；/n4）以293A细胞作为受体，将步骤3）获得的Mettl3 shRNA慢病毒表达载体进行慢病毒包被；/n5）将步骤4）获得的Mettl3 shRNA慢病毒侵染肠道上皮细胞，利用嘌呤霉素进行筛选，获得基因编辑敲除m6A甲基转移酶基因Mettl3的肠道上皮细胞。/n
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