[发明专利]一种下一代测序文库的制备方法

摘要

本发明公开了一种下一代测序文库的制备方法。按照如下步骤进行：DNA定量，在待测DNA片段的两端加上测序时需要的DNA接头序列，DNA文库的浓度和DNA片段长度分布模式的检测，DNA文库混合比例的计算和混合，混合文库的片段选择，被选择DNA文库的检测和定量，被选择DNA文库的测序。本发明的方法将多个文库在PCR后混合在一起进行一次片段分选和Q‑PCR定量，大大的降低了工作量，而且最终的测序数据量在不同样品中的分布没有受到显著影响。

主权项

1.一种下一代测序文库的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)DNA定量：将抽提的基因组DNA取2‑5μL，测定基因组DNA的浓度；(2)在待测DNA片段的两端加上测序时需要的DNA接头序列；(3)DNA文库的浓度和DNA片段长度分布模式的检测；(4)DNA文库混合比例的计算和混合：根据每个文库的浓度和该文库中目标片段占的比例，两者相乘即得到该文库中目标片段的浓度，该浓度信息是不同DNA文库混合的依据；根据目标片段的浓度，从每个文库都取相同总量的目标DNA进行混合，获得最终混合的文库；(5)混合文库的片段选择：将混合好的文库进行片段选择，可以用磁珠或琼脂糖凝胶切胶的方法选择目的DNA片段，也可以利用Life technology公司开发的预制琼脂糖凝胶电泳系统或Sage Science公司开发的Sage BluePippin、Sage ELF或Sage PippinHT，进行DNA文库片段选择；(6)被选择DNA文库的检测和定量：采用Fragment analyzer、Agilent Bioanalyzer 2100或Qsep100检测被选择文库的实际片段大小；文库的定量采用或Q‑PCR来测定；(7)被选择DNA文库的测序：根据文库的浓度，按照Illumina相关仪器的要求，上机测序。