[发明专利]一种检测EGFR突变位点的引物探针组合和试剂盒及其应用

摘要

本发明提供了用于检测EGFR基因18外显子、19外显子、20外显子、21外显子上特定突变的引物探针组合，和包含所述引物探针组合的用于多重液滴数字PCR检测EGFR突变位点的试剂盒，及其应用和使用方法。本发明的引物探针组合或试剂盒可高通量的检测EGFR基因29种突变位点，特异性强、灵敏度高、稳定性好，在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测上具重要意义，可以动态指导患者用药治疗。

主权项

1.一种用于检测EGFR基因18外显子、19外显子、20外显子、21外显子上特定突变的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包含下列中的一种或多种：18外显子：G719XG719X‑F：5’‑GATCAAAGTGCTG‑3’(SEQ ID NO:1)G719X‑R：5’‑GTTCGGCACGGTGTA‑3’(SEQ ID NO:2)G719X‑P1：5’‑ROX‑CGGAGGCCAGCAC‑MGB‑3’(SEQ ID NO:3)G719X‑P2：5’‑ROX‑CCGGAGCACAGCAC‑MGB‑3’(SEQ ID NO:4)G719X‑P3：5’‑ROX‑CCGGAGCTCAGCAC‑MGB‑3’(SEQ ID NO:5)19外显子：19del‑F：5’‑AAAGTTAAAATTCCCGTCGC‑3’(SEQ ID NO:6)19del‑R：5’‑TTTCCTTGTTGGCTTTCGGA‑3’(SEQ ID NO:7)19del‑P1：5’‑FAM‑CAAGGAGCCAACATCT‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:8)19del‑P2：5’‑FAM‑CAAGGAACCAACATCTCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:9)19del‑P3：5’‑CY5‑CGCTATCAAGTCTCC‑MGB‑3’(SEQ ID NO:10)19del‑P4：5’‑CY5‑CGCTATCAAGGAATAAGCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:11)19del‑P5：5’‑ROX‑AGCAATCTCCGAAAGCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:12)19del‑P6：5’‑FAM‑CAAGGAATCGAAAGC‑MGB‑3’(SEQ ID NO:13)19del‑P7：5’‑ROX‑CTATCAAGGCTC‑MGB‑3’(SEQ ID NO:14)19del‑P8：5’‑ROX‑CTATCAAGGCATCTCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:15)19del‑P9：5’‑ROX‑CTATCAAGACATCTCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:16)19del‑P10：5’‑ROX‑AGGATCCGAAAGC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:17)19del‑P11：5’‑CY5‑CGCTATCAAAACATCTC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:18)19del‑P12：5’‑FAM‑CAAGGAAGCAACATCTCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:19)19del‑P13：5’‑ROX‑CAAGGAACAGAAAGCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:20)19del‑P14：5’‑ROX‑CTATCAAGGAACATCTCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:21)19del‑P15：5’‑FAM‑CAAGGAATCTCCGA‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:22)19del‑P16：5’‑FAM‑CAAGGAACCGAAAGCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:23)19del‑P17：5’‑CY5‑CGCTATCAAGGTTCCGA‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:24)19del‑P18：5’‑FAM‑CAAGGAACCATCTCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:25)19del‑P19：5’‑CY5‑CGCTATCAAAATATCTCC‑BHQ‑3’(SEQ ID NO:26)20外显子：T790MT790M‑F：5’‑GCCTGCTGGGCATCTG‑3’(SEQ ID NO:27)T790M‑R：5’‑TCTTTGTGTTCCCGGACATAGTC‑3’(SEQ ID NO:28)T790M‑P：5’‑FAM‑ATGAGCTGCATGATGAG‑MGB‑NFQ‑3'(SEQ ID NO:29)S768IS768I‑F：5’‑TTCTGGCCACCATGCGAAGC‑3’(SEQ ID NO:30)S768I‑R：5’‑GATGAGCTGCACGGTGGAGGT‑3’(SEQ ID NO:31)S768I‑P：5’‑ROX‑TCCACGATGGCCA‑MGB‑3'(SEQ ID NO:32)20ins：20ins‑F：5’‑AAGCGTGTCAATTCTTAGCG‑3’(SEQ ID NO:33)20ins‑R：5’‑GTAAAACGACGGCCAGTGT‑3’(SEQ ID NO:34)20ins‑P1：5’‑CY5‑CGTGGCCAGCGTGGAC‑MGB‑NFQ‑3'(SEQ ID NO:35)20ins‑P2：5’‑CY5‑CAACCCCCACCACGTGTG‑MGB‑NFQ‑3'(SEQ ID NO:36)20ins‑P3：5’‑CY5‑CGTGGACGGTAACC‑MGB‑NFQ‑3'(SEQ ID NO:37)21外显子：L858R及L861QL858R‑F：5’‑GCAGCATGTCAAGATCACAGATT‑3’,(SEQ ID NO:38)L858R‑R：5’‑CC TCCTTCTGCATGGTATTCTTTCT‑3’(SEQ ID NO:39)L858R‑P：5'‑FAM‑TTTGGCCCGCCCAAAATCTGT‑BHQ1‑3’(SEQ ID NO:40)L861Q‑P：5'‑Cy5‑CACCCAGCTGTTTGGCC‑BHQ1‑3’(SEQ ID NO:41)。