[发明专利]一种分离制备矮牵牛素-3-O-半乳糖苷的方法

摘要

本发明一种分离制备矮牵牛素‑3‑O‑半乳糖苷的方法，包括醇提浓缩、大孔树脂吸附、制备液相色谱纯化和高速逆流色谱分离，从花色苷组成复杂的蓝莓原料中分离制备高纯度矮牵牛素‑3‑O‑半乳糖苷单体。本发明首次将制备液相色谱和高速逆流色谱技术结合，并通过对工艺参数的优化，从蓝莓中分离得到高纯度的矮牵牛素‑3‑O‑半乳糖苷单体，其纯度最高可达99％。

主权项

1.一种分离制备矮牵牛素-3-O-半乳糖苷的方法，其特征在于，包括：/n(1)醇提浓缩：以蓝莓为原料，经醇提浓缩得到蓝莓花色苷粗提液；/n(2)大孔树脂吸附：将所述蓝莓花色苷粗提液注入大孔树脂，经洗脱及后处理得到蓝莓花色苷提取物冻干粉；/n(3)制备液相色谱纯化：/n先将所述蓝莓花色苷提取物冻干粉经去离子水复溶后，再注入制备液相色谱仪中进行纯化，所述复溶后的浓度为30～50mg/mL，进样量为1～4mL；/n采用C18色谱柱，经流动相进行梯度洗脱，再经后处理得到矮牵牛素-3-O-半乳糖苷粗品冻干粉；所述C18色谱柱的规格为20mm×250mm，温度为30℃；/n所述流动相：A相为纯甲醇或甲酸体积百分浓度为0.1％的甲酸-甲醇体系，B相为甲酸体积百分浓度为3～5％的甲酸-水体系，流动相的流速为5～10mL/min；/n所述梯度洗脱的程序为：A相的体积百分浓度在0～5min内保持5％不变，在5～30min内从5％上升至60％，收集18～19min的洗脱物；/n(4)高速逆流色谱分离：/n以正丁醇-甲基叔丁基醚-甲醇-水-三氟乙酸为两相溶剂体系，配制所述两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，以20～30mL/min的流速将所述固定相泵入高速逆流色谱仪中，在25～30℃、主机转速为850～1000r/min的条件下，以1～3mL/min的流速泵入所述流动相，待两相达到平衡后，将所述矮牵牛素-3-O-半乳糖苷粗品冻干粉用流动相溶解后进样，经液相检测后，收集仅包含目标产物的流出液，再经减压浓缩、冷冻干燥后得到矮牵牛素-3-O-半乳糖苷单体；/n所述矮牵牛素-3-O-半乳糖苷粗品冻干粉用流动相溶解后的浓度为15～35mg/mL，进样体积为1～15mL；/n所述液相检测的波长为280nm；/n所述正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的体积比为2：2：1：5：0.01～0.1。/n