[发明专利]一种达旦提狄克氏菌TaqMan荧光定量PCR检测方法及应用在审
| 申请号： | 201810524467.4 | 申请日： | 2018-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN109136394A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 楼兵干;沈肖玲;易建平;仇智灵;王荣洲;李艳敏 | 申请（专利权）人： | 浙江大学;杭州市临安区农业局;浙江省农业厅 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 谈杰 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种达旦提狄克氏菌TaqMan荧光定量PCR检测方法及应用。该检测方法所用到的引物及探针包括引物Ddad3、Ddad4和TaqMan探针Addad2，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。该检测方法包括以下步骤：提取待测样品DNA；以样品DNA为模板，加入上述的达旦提狄克氏菌TaqMan荧光定量PCR检测的引物及探针，进行实时荧光定量PCR检测；根据Ct值和预期扩增曲线判断检测样品中是否含有达旦提狄克氏菌。本发明建立的基于TaqMan探针的荧光定量PCR检测体系可用于甘薯茎腐病疑似样本、病残体、田间土壤和种薯种苗的快速检测。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光定量PCR检测 克氏菌 引物 探针 检测 实时荧光定量PCR 核苷酸序列 待测样品 检测样品 快速检测 扩增曲线 田间土壤 样品DNA 病残体 甘薯茎 可用 种苗 种薯 样本 应用 | ||
【主权项】：
1.一种达旦提狄克氏菌TaqMan荧光定量PCR检测的引物及探针，其特征在于，包括引物Ddad3、Ddad4和TaqMan探针Addad2，其中，Ddad3：5’‑ACCCAGGCCACCAGAAGT‑3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；Ddad4：5’‑GACGGTACTGTTACCGCTAC‑3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；TaqMan探针Addad2：5’‑CAGTGGTGCCTGCGCCAAC‑3’，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；其中，TaqMan探针Addad2的5’端标记荧光报告基因FAM，3’端标记荧光猝灭基团MGB。
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