[发明专利]一种检测叶酸代谢相关基因遗传信息的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测叶酸代谢相关基因遗传信息的方法及试剂盒，涉及MTHFR基因rs1801133位点、rs1801131位点及MTRR基因rs1801394三个位点。本发明综合运用直接PCR、巢式PCR、多重PCR、创造酶切位点法PCR及PCR‑RFLP等技术，在无需提取DNA的情况下，直接使用细胞进行2轮PCR扩增，每个位点的第2轮PCR产物均可使用廉价的限制性核酸内切酶HinfI快速酶切分型，可根据实际需要，同管一次性检测三个位点，也可同管一次性检测两个位点，更可单独检测其中任何一个位点。所有PCR产物均有酶切内对照序列作为酶切的质控，以保证结果判断的准确性。整个流程操作简便、成本低廉，准确性极有保障。

主权项

1.一种同时检测3个与叶酸代谢相关的基因多态性位点的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将样品通过巢式PCR扩增靶位点，所述巢式PCR的引物由引物对1、2、3、4、5、6组成，其中引物对1、3、5为外引物对，引物对2、4、6为内引物对；或者所述巢式PCR的引物由引物对1、2、3、4、7、8组成，其中引物对1、3、7为外引物对，引物对2、4、8为内引物对；2)利用限制性核酸内切酶对巢式PCR产物进行酶切；3)将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳图谱的特征条带确定3个基因多态性位点的基因型；上述所有引物对的具体序列如下：引物对1F1：TTGAACAGGTGGAGGCCAGCCT(SEQ ID NO：1)，R1：ACTGAGTGAGAACCTCCAGGGGTG(SEQ ID NO：2)；引物对2F2：CTGACTGTCATCCCTATTGG(SEQ ID NO：3)，R2：GACCTGGAGATCCACTTTTTG(SEQ ID NO：4)；引物对3F3：ACATCTTTGTTCTTGGGAGCGGG(SEQ ID NO：5)，R3：AGGATGCCCTGGCGGTTCAC(SEQ ID NO：6)；引物对4F4：CTAATACGACTGACTATAGGGAGAGGGGAGGAGCTGACCAGTGAAT(SEQ ID NO：7)，R4：TCATCGTTCCAGGGCAGGCAAGT(SEQ ID NO：8)；引物对5F5：GGAGCTTGTCTACAGGGTTGCACTT(SEQ ID NO：9)，R5：ACGGCTCTAACCTTATCGGATTCACTA(SEQ ID NO：10)；引物对6F6：AAGCGGTCTTCGCATTTACGGTTTCTTAAAGATTGAGGGAGAATCAA(SEQ ID NO：11)，R6：TGTGGACCGATGGGCTTACCTGTACCACAGCTTGCTGACT(SEQ ID NO：12)；引物对7F7：CTGTTGTGAATGATACTGTGGCT(SEQ ID NO：13)，R7：CACAAAAGAATCTAGGCGGTC(SEQ ID NO：14)；引物对8F8：CCCACGAGGAGCCTTAAAGATTGAGGGAGAATCAA(SEQ ID NO：15)，R8：AGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGAAATCCATGTACCACAGCTTGCTGACT(SEQ ID NO：16)。