[发明专利]沙门氏菌快速测试片检测方法

摘要

本发明涉及微生物检验和食品生产环境卫生检测技术领域，尤其涉及沙门氏菌快速测试片检测方法以及其在食品生产领域中的应用。本发明检测方法包括前增菌、水化测试片、接种、结果观测、结果确认等步骤。与现有沙门氏菌检测方法相比，本发明方法具有操作简便(恒温培养、一步增菌)、结果准确、漏检率低、响应快速、检测用时短(用时2天)、适用面广等特点。本发明方法不仅适用于固体或液体类食品产品检测，同时还可用于对食品生产企业的生产环境和生产机器设备进行随机大批量检测和实时监控。

主权项

1.一种沙门氏菌快速测试片检测方法，其特征在于包括下述步骤：(1)前增菌：称取37.0g沙门氏菌增菌肉汤基础培养基，将其加入到1L蒸馏水中，加热至80‑90℃，充分搅拌直至其完全溶解后按照225ml/瓶的规格进行小瓶分装，将上述装有培养液的小瓶在121℃、98kPa热压灭菌15min，灭菌完毕后冷却至室温，然后向每瓶培养液中加入4.0‑5.5ml杂菌生长抑制剂溶液，搅拌均匀即得到混合培养液，其中所述杂菌生长抑制剂溶液是将1.0g杂菌生长抑制剂溶解于400ml蒸馏水中制得的；将检测样本置于无菌采样袋中，向其中加入225ml上述混合培养液，均质2‑3min，40.5‑42.5℃培养18‑24h，即得到增菌液；(2)水化测试片：将冻存的沙门氏菌测试片在室温下放置5min，然后掀起测试片上层膜，将2ml无菌水垂直滴在测试片底层薄膜的中央位置，将上层膜缓慢盖下，避免有气泡产生，室温避光静置1‑2h，直至凝胶成型；然后在室温下水化测试片5‑10min，并观察水化后测试片的颜色变化，当测试片颜色变为红色时，测试片水化完成；(3)接种：掀起上述水化完成后的测试片的上层膜，使用已灭菌的10μl光滑接种环蘸取一满环上述增菌液，在测试片凝胶表面从上至下划线，获得分离菌落后将上层膜缓慢盖下，轻轻涂抹所述上层膜的上表面，排出接种区域的空气，然后将接种完成的测试片在40.5‑42.5℃条件下培养22‑26h；(4)结果观测：培养完成后观察测试片上菌落的颜色及外围特征，并根据下述标准初步判定检测结果：a.菌落呈红色、暗红色或褐色，并带有黄色晕圈或气泡，判定为沙门氏菌阳性；b.菌落呈红色、暗红色或褐色，但不带有黄色晕圈或气泡，判定为沙门氏菌阴性；c.菌落呈红色、暗红色或褐色，并带有紫红色晕圈，判定为沙门氏菌阴性；d.菌落呈蓝色、绿色、蓝绿色或黑色，判定为沙门氏菌阴性；检测结果初步判定完成后，在判定为沙门氏菌阳性的测试片的上层膜上标记出推测阳性的菌落，至少标记出五个单独的假定阳性沙门氏菌菌落；(5)结果确认：向上述假定阳性沙门氏菌菌落加入沙门氏菌确认反应片，在40.5‑42.5℃条件下培养4‑5h，观察菌落颜色变化，当菌落颜色由绿色变为蓝色、深蓝色或黑色，或者菌落周围产生蓝色沉淀环绕，判定为生化确认的沙门氏菌。