[发明专利]单增李斯特氏菌活菌的快速检测方法在审
| 申请号： | 201810390524.4 | 申请日： | 2018-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN109055514A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 曾小敏 | 申请（专利权）人： | 曾小敏 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 吕彩霞 |
| 地址： | 564509 贵州省*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了单增李斯特氏菌活菌的快速检测方法，该检测方法的步骤为：将单增李斯特氏菌接种胰酪胨大豆琼脂培养基中培养得菌悬液；取培养菌悬液，避光条件下加入叠氮溴乙锭溶液，黑暗中静置，取出曝光，离心，弃上清，用超纯水重悬1次；沸水浴提取DNA，离心，上清液即为DNA模板；基于GeneBank公布的单增李斯特菌hlyA基因序列，使用引物设计软件Primer Premier 5.0对PCR引物进行设计；将提取DNA模板进行PCR扩增，以CP值判断结果。有益效果为：本发明检测方法特异性、重复性好，增菌效率、灵敏度、准确率高，可快速鉴别单增李斯特氏菌死态和活态细菌，检测成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 单增李斯特氏菌 快速检测 提取DNA 菌悬液 活菌 检测 大豆琼脂培养基 引物设计软件 避光条件 快速鉴别 李斯特菌 判断结果 灵敏度 超纯水 沸水浴 上清液 胰酪胨 溴乙锭 准确率 叠氮 增菌 重悬 接种 细菌 取出 黑暗 曝光 | ||
【主权项】：
1.单增李斯特氏菌活菌的快速检测方法，其特征在于：所述检测方法具体包括以下步骤：步骤1：将单增李斯特氏菌接种到含有5号胆盐和半胱氨酸的胰酪胨大豆琼脂培养基中培养，即得菌悬液，所述半胱氨酸含有右旋体；步骤2：取培养菌悬液，避光条件下加入含有去氧胆酸钠和肉碱的叠氮溴乙锭溶液（EMA），轻微振荡混匀，黑暗中静置，然后将菌液取出曝光，结束后离心，弃上清，用超纯水重悬1次；步骤3：沸水浴提取DNA，离心，上清液即为DNA模板；步骤4：基于GeneBank公布的单增李斯特菌hlyA基因序列，使用引物设计软件Primer Premier 5.0对PCR引物进行设计；步骤5：将提取DNA模板进行PCR扩增；步骤6：根据LightCycler480荧光定量PCR仪操作手册，选用“最大二阶导数法”进行分析，以CP值判断结果。
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