[发明专利]高密度培养大肠杆菌细胞的方法在审
| 申请号： | 201810313598.8 | 申请日： | 2013-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN108410788A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 许容豪;吴宜林;郑圣烨;权世昌 | 申请（专利权）人： | 韩美科学株式会社 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P21/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 王永伟;颜芳 |
| 地址： | 韩国*** | 国省代码： | 韩国;KR |
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| 摘要： | 本发明公开一种高密度培养大肠杆菌细胞的方法，其包含细胞生长步骤和表达诱导步骤，通过所述步骤可以获得细胞质量的最大值以及伴随的重组蛋白的最大表达。可以使用本发明的培养方法使经转型以产生相关重组蛋白的大肠杆菌以高浓度生长。因此，所述方法增加了细胞的生产率以及所述重组蛋白的生产量，并且可以广泛应用于有效生产重组蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 重组蛋白 大肠杆菌细胞 高密度培养 大肠杆菌 细胞 生产重组 细胞生长 伴随的 转型 诱导 蛋白 生长 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高密度培养表达免疫球蛋白Fc片段的重组大肠杆菌细胞的方法，其包括：(i)在细胞生长培养基中以分批培养模式培养所述大肠杆菌细胞直到所述细胞生长培养基的pH增加0.1或更高；(ii)向步骤(i)中得到的细胞培养物添加第一进料培养基，并且以恒酸度分批进料培养模式培养所述大肠杆菌细胞，直到培养物的600nm吸光度(OD600)达到120至180，其中在步骤(ii)中所述第一进料培养基在400到800rpm速度的搅拌下以200到400ml/hr的速率进给，并且进给速率和搅拌速度逐步增加；(iii)向步骤(ii)中得到的OD600为120至180的细胞培养物添加第二进料培养基，并且以分批进料培养模式培养所述大肠杆菌细胞，其中在步骤(iii)的培养期间所述培养物的pH增加，其中在步骤(iii)中所述第二进料培养基在400到800rpm速度的搅拌下以200到400ml/hr的速率进给，并且进给速率和搅拌速度逐步减小；和(iv)在步骤(iii)期间诱导所述免疫球蛋白Fc片段的表达，其中所述免疫球蛋白Fc片段仅在所述细胞培养物达到150或更高的OD600值时、仅在步骤(iii)中表达；并且其中进行步骤(iii)的培养以获得具有200或更高的最终OD600值的细胞培养物。
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