[发明专利]一种利用哺乳动物胚胎培养液检测小RNA的方法在审
| 申请号： | 201810265343.9 | 申请日： | 2018-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN110317862A | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 王峙峤;胡小明 | 申请（专利权）人： | 顶探科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 胡丹;徐迅 |
| 地址： | 100102 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明是一种提取检测RNA的种类及表达量的方法，特别是提取检测细胞的培养液中微量RNA的方法。多种细胞在培养过程中会向培养液中分泌微量的RNA分子，本方法是通过可能含有RNA的样本特别是细胞的培养液中的RNA分子3’端与5’端加接头，继而进行反转录反应，再进行扩增，还可以利用二代测序的方法对扩增完的DNA产物进行分析，从而判断细胞分泌到培养液中的RNA的种类及表达量的方法。本发明的提取扩增方法，可以结合测序等方法对RNA检测，操作简便，可在不破坏原细胞的情况下获悉细胞中的RNA信息。 | ||
| 搜索关键词： | 培养液 扩增 细胞 提取检测 表达量 测序 哺乳动物胚胎 细胞分泌 反转录 原细胞 小RNA 分泌 样本 检测 分析 | ||
【主权项】：
1.一种提取提取检测RNA的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)提供可能含有RNA的样本；(2)加入裂解液和RNA消化酶抑制剂；(3)加入DNA消化酶消化样本中的DNA；(4)加入核糖体RNA抑制引物；(5)加入3’接头引物和RNA连接酶，使之连接于样本中RNA的3’端；(6)加入反转录引物；(7)加入5’接头引物和RNA连接酶，使之连接于样本中RNA的5’端；(8)加入RNA消化酶抑制剂及反转录酶进行反转录；(9)加入RNA消化酶消化样本中的RNA；(10)加入扩增引物和DNA聚合酶进行PCR扩增反应；(11)在步骤10反应结束后，加入扩增引物和DNA聚合酶进行二次PCR扩增反应。
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