[发明专利]硫化叶菌蛋白复合物的表达载体的构建及表达纯化方法

摘要

本发明公开了一种硫化叶菌蛋白复合物的表达载体的构建及表达纯化方法。所述的构建方法利用大肠杆菌质粒给硫化叶菌目标蛋白复合物的亚基基因带上10×His‑StrepⅡ标签序列，然后将带标签的目的基因连接到pSeSD中，得到pSeSD表达载体，再将pSeSD表达载体转化到硫化叶菌中，阿拉伯糖诱导目的基因表达，通过该亚基与蛋白复合物其他亚基间的相互作用，利用目的蛋白上的His标签纯化整个蛋白复合物。本发明方法使硫化叶菌复合物的表达纯化更加简单，且易于操作，可以用于硫化叶菌复合物的研究工作。

主权项

1.硫化叶菌蛋白复合物的表达载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1，设计一段带有10×His‑StrepⅡ标签序列的合成序列，序列上带有4个酶切位点，顺序是XhoⅠ‑NdeⅠ‑任意序列‑SalⅠ‑10×His‑StrepⅡ‑NotⅠ，通过限制性内切酶XhoⅠ和NotⅠ将合成序列连接到质粒载体pBluescriptⅡKS(‑)中，得到pKS‑10×His‑StrepⅡ载体；步骤2，设计PCR引物，分别带有限制性内切酶酶切位点NdeⅠ和SalⅠ，通过硫化叶菌基因组的PCR反应得到目的蛋白复合物亚基基因的PCR产物，用限制性内切酶NdeⅠ和SalⅠ分别酶切该PCR产物和pKS‑10×His‑StrepⅡ质粒，通过T4连接酶连接，得到pKS‑目的基因‑10×His‑StrepⅡ载体；步骤3，用限制性内切酶NdeⅠ和NotⅠ分别酶切质粒pSeSD和pKS‑目的基因‑10×His‑StrepⅡ载体，通过连接反应，得到pSeSD‑目的基因‑10×His‑StrepⅡ载体。