[发明专利]一种“红阳”猕猴桃半木质化带芽茎段的组培育苗方法

摘要

一种“红阳”猕猴桃半木质化带芽茎段的组培育苗方法，该方法包括外植体消毒处理、腋芽初诱导培养、丛生芽继代增殖培养和生根培养4个技术环节，方法以刚萌发15～20天的半木质化带芽茎段为外植体，依次通过抗氧化剂Vc和柠檬酸混合蒸馏水溶液、高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡、消毒的方法将外植体褐变污染率控制在10%以下；最后通过在初诱导和继代增殖培养二阶段的培养基中添加活性炭和聚乙烯吡咯烷酮来吸附有害物质和抑制酚类物质分解，保障丛生芽诱导分化率在95%以上，增值系数9.0以上。在生根培养基中添加蛋白胨，生根率达100%，平均每株分化根系5～8根。本方法简便易行，为该猕猴桃良种种苗工厂化培育技术体系集成提供依据。

主权项

1.一种“红阳”猕猴桃半木质化带芽茎段的组培育苗方法，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体消毒：采集刚萌发15～20d的“红阳”猕猴桃半木质化新梢，去掉叶片，取带芽茎段做外植体；冲洗干净后，用3000 mg.L‑1维生素C+2000 mg.L‑1柠檬酸蒸馏水溶液浸泡50min，然后用4500 mg.L‑1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡40min，用蒸馏水冲洗5次，再用1000 mg.L‑1氯化汞水溶液常规消毒15min，蒸馏水冲洗5次；（2）确定培养基和培养条件：植物细胞组织培养各阶段的基本培养基均为：1/2MS+12 g.L‑1琼脂+35 g.L‑1蔗糖，pH值6.0；各阶段培养条件为：温度24℃～26℃，光照为1500～2000Lux，光照时间为12～14h/d；（3）腋芽初诱导培养：将消毒后的外植体按生长极性竖立接种，诱导腋芽萌发；培养35d后，可萌发9～10个长约1.0cm的丛生芽；培养基配方：基本培养基+2.5g.L‑1活性炭+1.8 g.L‑1 聚乙烯吡咯烷酮+2.8 mg.L‑1 噻苯隆+0.02～0.04mg mg.L‑1 萘乙酸；（4）丛生芽继代增殖培养：用刀片将高度1.0cm以下丛生芽从基部分割成单芽后按极性竖立接种，诱导丛生芽继代增殖；培养40d后，每个单株从基部萌蘖分化出9～12个丛生芽；培养基配方为：基本培养基+2.5g.L‑1活性炭+1.8g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮+3.5 mg.L‑1 噻苯隆+0.01mg.L‑1 萘乙酸；（5）生根诱导培养：将继代增殖形成的1.5cm高以上丛生芽剪切成单芽后接种于的生根培养基上，诱导生根；培养45d后，100%产生根系，每株5～8根，根长1.0‑3.5cm；培养基配方：基本培养基+2 g.L‑1蛋白胨+0.2 mg.L‑1 6‑卞氨基嘌呤+0.2 mg.L‑1 吲哚丁酸+0.9 mg.L‑1萘乙酸。