[发明专利]一种“红阳”猕猴桃半木质化带芽茎段的组培育苗方法

权利要求书

1.一种“红阳”猕猴桃半木质化带芽茎段的组培育苗方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体消毒：采集刚萌发15～20d的“红阳”猕猴桃半木质化新梢，去掉叶片，取带芽茎段做外植体；冲洗干净后，用3000 mg·L^-1维生素C+2000 mg·L^-1柠檬酸蒸馏水溶液浸泡50min， 然后用4500 mg·L^-1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡40min，用蒸馏水冲洗5次，再用1000mg·L^-1氯化汞水溶液常规消毒15min，蒸馏水冲洗5次；

（2）确定培养基和培养条件：植物细胞组织培养各阶段的基本培养基均为：1/2MS+12g·L^-1琼脂+ 35g·L^-1蔗糖，pH值6.0；各阶段培养条件为：温度24℃～26℃，光照为1500～2000Lux，光照时间为12～14h/d；

（3）腋芽初诱导培养：将消毒后的外植体按生长极性竖立接种，诱导腋芽萌发；培养35d后，萌发9～10个长约1.0cm的丛生芽；培养基配方：基本培养基+2.5g·L^-1活性炭+1.8 g ·L^-1 聚乙烯吡咯烷酮+2.8 mg·L^-1噻苯隆+0.02～0.04 mg·L^-1萘乙酸；

（4）丛生芽继代增殖培养：用刀片将高度1.0cm以下丛生芽从基部分割成单芽后按极性竖立接种，诱导丛生芽继代增殖；培养40d后，每个单株从基部萌蘖分化出9～12个丛生芽；培养基配方为：基本培养基+2.5g·L^-1活性炭+1.8g·L^-1聚乙烯吡咯烷酮+3.5 mg·L^-1噻苯隆+0.01mg·L^-1萘乙酸；

（5）生根诱导培养：将继代增殖形成的1.5cm高以上丛生芽剪切成单芽后接种于生根培养基上，诱导生根；培养45d后，100%产生根系，每株5～8根，根长1.0-3.5cm；培养基配方：基本培养基+2g·L^-1蛋白胨+0.2 mg·L^-1 6-苄氨基嘌呤+0.2 mg·L^-1吲哚丁酸+0.9 mg·L^-1萘乙酸。