[发明专利]一种咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法

摘要

本发明公开了一种咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法，包括锈菌夏孢子的制备、离体叶片的制备和接种鉴定；其中锈菌夏孢子的制备包括接种培养盒的制备、采集具有典型咖啡锈菌病斑的咖啡发病叶片上的锈菌夏孢子，并将锈菌夏孢子涂在感病品种的叶片背面，重复接种获得纯化锈菌株系。本发明中的咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法，可以确保每份待鉴定种质材料的接种条件、接种压力和发病条件高度一致，最大限度的降低因接种环境和发病环境不一致造成的实验误差，提高了鉴定结果的准确性，此外离体接种鉴定摆脱了大田鉴定对季节的依赖，使抗锈病鉴定能够随时开展，大大提高了工作效率。

主权项

1.一种用于咖啡锈病抗性离体鉴定的锈菌夏孢子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)接种培养盒的制备：用浓度为70～75％的酒精浸泡海绵3～5分钟，后晾干，铺在塑料培养盒底部，用无菌水将海绵浸湿；2)采集具有典型咖啡锈菌病斑的咖啡发病叶片，刮下锈菌夏孢子，并将所述锈菌夏孢子涂在感病品种Caturra或Matari的叶片背面，使所述锈菌夏孢子均匀分布，并喷上水雾至有水膜产生；然后将接种叶片背面朝上，置于所述接种培养盒内的海绵上，20～25℃暗培养40‑50h，之后明暗交替培养35～40天；3)将所述接种叶片上出现的单个锈菌夏孢子堆，接种在新的Caturra或Matari叶片上，重复步骤2)和步骤3)2～3次，获得纯化的锈菌株系；4)取出产孢叶片，将所述锈菌夏孢子收集后放入胶囊，在相对湿度为45‑55％的干燥器中5℃保存。