[发明专利]一种咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法

权利要求书

1.一种用于咖啡锈病抗性离体鉴定的锈菌夏孢子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)接种培养盒的制备：用浓度为70～75％的酒精浸泡海绵3～5分钟，后晾干，铺在塑料培养盒底部，用无菌水将海绵浸湿；

2)采集具有典型咖啡锈菌病斑的咖啡发病叶片，刮下锈菌夏孢子，并将所述锈菌夏孢子涂在感病品种Caturra或Matari的叶片背面，使所述锈菌夏孢子均匀分布，并喷上水雾至有水膜产生；然后将接种叶片背面朝上，置于所述接种培养盒内的海绵上，20～25℃暗培养40-50h，之后明暗交替培养35～40天；

3)将所述接种叶片上出现的单个锈菌夏孢子堆，接种在新的Caturra或Matari叶片上，重复步骤2)和步骤3)2～3次，获得纯化的锈菌株系；

4)取出产孢叶片，将所述锈菌夏孢子收集后放入胶囊，在相对湿度为45-55％的干燥器中5℃保存。

2.根据权利要求1所述的一种用于咖啡锈病抗性离体鉴定的锈菌夏孢子，其特征在于，步骤2)中所述感病品种Caturra或Matari的叶片为刚刚展开，幼嫩柔软的叶片。

3.根据权利要求1所述的一种用于咖啡锈病抗性离体鉴定的锈菌夏孢子，其特征在于，步骤2)中使所述锈菌夏孢子均匀分布在感病品种Caturra或Matari叶片背面的方法为利用毛笔轻刷。

4.根据权利要求1所述的一种用于咖啡锈病抗性离体鉴定的锈菌夏孢子，其特征在于，步骤2)中在所述明暗交替培养期间，保持海绵湿润；在接种后3-4天吸干所述接种叶背面的水，并用脱脂棉擦拭所述接种叶背面。

5.根据权利要求1所述的一种用于咖啡锈病抗性离体鉴定的锈菌夏孢子用于咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)离体叶片的制备：采摘待鉴定种质的叶片，剪去叶柄使叶背面朝上，放入制备好的如权利要求1所述的接种培养盒中；

2)接种鉴定：将制备好的如权利要求1所述的锈菌夏孢子涂在离体叶片上，使所述锈菌夏孢子均匀分布，并喷上水雾至有水膜产生，在人工培养箱中，20～25℃，暗培养40-50h，之后在明暗交替的环境下培养35～40天，后调查鉴定材料病斑类型、大小、病斑产孢情况。

6.根据权利要求5所述的一种咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法，其特征在于，步骤1)中所述待鉴定种质的叶片为刚展开幼嫩柔软的叶片。

7.根据权利要求5所述的一种咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法，其特征在于，步骤2)中使锈菌夏孢子均匀分布在离体叶片上的方法为用毛笔轻刷。

8.根据权利要求5所述的一种咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法，其特征在于，步骤2)中在所述明暗交替培养期间，保持海绵湿润，并在接种后3-4天吸干接种叶背面的水，并用脱脂棉擦拭所述接种叶背面。

9.根据权利要求5所述的一种咖啡种质锈病抗性的离体鉴定方法，其特征在于，将锈病抗性分为0-4级，所述抗性0级为叶片表面不产生任何病斑，抗性类型为免疫；所述抗性1级为叶片表面有褪色斑或瘤痂出现，抗性类型为抗病；所述抗性2级为叶片病斑的产孢面积占叶片病斑面积的50％以下，抗性类型为中抗；所述抗性3级为叶片病斑的产孢面积超过50％但少于95％，抗性类型为中感；所述抗性4级为病斑的产孢面积超过95％，抗性类型为感病。