[发明专利]基于荧光染料TOTO-1分析检测PARP-1活性的方法有效

专利信息
申请号: 201810094086.7 申请日: 2018-01-31
公开(公告)号: CN108300759B 公开(公告)日: 2021-03-30
发明(设计)人: 刘勇;杨海堂;卫伟 申请(专利权)人: 河南大学
主分类号: C12Q1/48 分类号: C12Q1/48;G01N21/64
代理公司: 北京中知法苑知识产权代理有限公司 11226 代理人: 常玉明
地址: 475000*** 国省代码: 河南;41
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摘要: 发明公开了一种基于TOTO‑1荧光染料分析检测PARP‑1活性的方法。所述方法步骤如下:(1)激活DNA、PARP‑1(多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶‑1)、NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)混合反应,PARP‑1催化合成带大量负电荷的PAR聚合物(聚ADP‑核糖);(2)得到的产物用ExoIII切除双链。释放出PAR;(3)将TOTO‑1(噻唑橙二聚体‑1)与产物PAR聚合物作用,利用荧光光谱仪对产物溶液进行检测。本发明利用TOTO‑1与产物PAR聚合物结合后产生的荧光信号的增强作用,观察荧光信号强度变化,可用于检测PARP‑1酶。本发明具有简便、快速、灵敏度高、而且无需标记DNA探针的优点。
搜索关键词: 基于 荧光 染料 toto 分析 检测 parp 活性 方法
【主权项】:
1.一种基于TOTO‑1(噻唑橙二聚体‑1)分析检测PARP‑1(多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶‑1)活性的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)激活DNA、PARP‑1、NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)混合反应,PARP催化合成带大量负电荷的PAR聚合物(聚ADP‑核糖);(2)将得到的产物用ExoIII切除双链,释放出所述PAR;(3)将TOTO‑1与产物PAR孵育,利用荧光光谱仪对产物溶液进行检测。
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