[发明专利]一种透明质酸酶的制备方法在审
| 申请号： | 201810085468.3 | 申请日： | 2018-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN108220272A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 史政豪;徐国华;袁峰;赵伏梅 | 申请（专利权）人： | 江苏神华药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/26 | 分类号： | C12N9/26;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京思创大成知识产权代理有限公司 11614 | 代理人： | 尹慧晶 |
| 地址： | 211600 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于发酵工程技术领域，具体公开了一种透明质酸酶的制备方法。本发明通过优化发酵条件，找出了合适的甘油、甲醇补加速率和补加时间以及总诱导时间等条件，实现了透明质酸酶的高效表达，为进一步降低水蛭透明质酸酶的生产成本和扩大应用范围奠定了一定的基础，适合于工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 透明质酸酶 制备 发酵工程技术 优化发酵条件 高效表达 甘油 补加 甲醇 水蛭 生产成本 诱导 应用 | ||
【主权项】：
1.一种透明质酸酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将透明质酸酶的生产菌种接入种子培养基中并培养至对数期；(2)将步骤1)得到的种子液按10～15％的接种量接入发酵培养基，通入氧气，控制溶氧20～50％、pH为5.3～5.5，在温度为29.5～30.5℃的条件下进行发酵，细胞产量达到50～100g/L湿细胞；(3)发酵结束后，开始流加浓度50％的甘油溶液，并在甘油溶液中添加PTM1，PTM1的添加量为10‑15mL/L甘油；补料速度为16～20mL每小时每升初始发酵液体积，补料时间为10～14h，本阶段完成后细胞产量达到180～220g/L湿细胞；(4)进入甲醇诱导阶段，终止甘油的补料并且开始用含10‑15mL/L PTM1的甲醇进行诱导，设定补料速率为3.0～4.0mL/h每升初始发酵液体积，此补料速率维持1～3h；然后补加速率增加至7.0～8.0mL/h每升初始发酵液体积，维持2～4h；最后，增大甲醇流加速率至10～12mL/h每升初始发酵液体积，并保持至发酵过程结束。
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