[发明专利]一种透明质酸酶的制备方法

说明书

本发明属于发酵工程技术领域，具体公开了一种透明质酸酶的制备方法。本发明通过优化发酵条件，找出了合适的甘油、甲醇补加速率和补加时间以及总诱导时间等条件，实现了透明质酸酶的高效表达，为进一步降低水蛭透明质酸酶的生产成本和扩大应用范围奠定了一定的基础，适合于工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种透明质酸酶的制备方法，属于发酵工程技术领域。

背景技术

透明质酸是一种酸性粘多糖，1934年美国哥伦比亚大学眼科教授Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。由N-乙酰氨基葡糖和D-葡糖醛酸双糖重复单位构成的无分支高分子糖胺聚糖，存在于动物组织细胞间质和某些细菌的荚膜中。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质。

近年来研究发现，低分子量的HA(低于1×10⁴)和透明质酸寡糖具有独特的生物学功能。根据文献研究表明，分子量大小对HA的生物活性影响较大，不同分子量范围的HA却表现出截然不同的生理学功能。高分子量的HA(Mr>2×10⁶)由于具有较好的粘弹性、保湿性、抑制炎性反应、润滑等功能，可应用于高端化妆品行业、眼科手术黏弹剂和关节腔内注射治疗。中等分子量的HA(介于1×10⁵-10⁶)具有良好的保湿性、润滑和药物缓释作用，可广泛用于化妆品、滴眼液、皮肤烧伤愈合及术后防粘连。低分子量的HA(低于1×10⁴)和寡聚透明质酸，表现出非常强的生物活性，具有抑制肿瘤扩散、促进创伤愈合、促进骨和血管生成、免疫调节等作用，且易于渗透到真皮中，免疫细胞、细胞因子的激活剂。因此，小分子透明质酸在食品保健、化妆品以及临床医疗领域具有广阔的应用前景。

寡聚透明质酸在体内具有促血管生成作用，在体外可促进内皮细胞的增生，促进创伤愈合(West DC,Kumar S.The effect of hyaluronate and its oligosaccharides onendothelial cell proliferation and monolayer integrity.Exp Cell Res.1989,183(1):179-96)。寡聚透明质酸盐具有促血管生成、促进创伤愈合等生物活性，在医药领域具有良好的应用前景。

在炎症过程中，寡聚透明质酸对树突细胞和巨噬细胞等免疫活性细胞具有强力活化作用(Termeer C,Benedix F,Sleeman J,et al.Oligosaccharides of Hyaluronan activate dendritic cellsvia toll-like receptor4.JExp Med.2002,195(1):99-111)。

研究发现，寡聚透明质酸具有抗肿瘤作用。如寡聚透明质酸在体外可以抑制小鼠TA3/st乳腺癌细胞、大鼠C6神经胶质瘤细胞、人HCT克隆瘤细胞及人LX1肺癌细胞的生长，抑制率为50％～100％(Ghatak S,Misra S,Toole BP.Hyaluronan constitutively regulatesErbB2phosphorylation and signaling complex formation in carcinoma cells.JBiol Chem.2005,280(10):8875-83)。