[发明专利]一种RNA甲基化酶TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系及其构建方法在审
申请号: | 201810043530.2 | 申请日: | 2018-01-17 |
公开(公告)号: | CN108148861A | 公开(公告)日: | 2018-06-12 |
发明(设计)人: | 崔恒宓;徐慧;孙振;薛松磊 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/90;C12N5/10 |
代理公司: | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人: | 卢亚丽 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明提供一个应用于一种RNA甲基化酶TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系及其构建方法,该方法是通过两个分别包含抗生素筛选基因的同源重组载体、gRNA载体TRDMT1‑gRNA,以及表达Cas9的载体混合转染HEK293细胞,将两个抗生素筛选基因和转录终止信号片段整合到TRDMT1基因的第一外显子前,以终止其转录,通过抗性筛选,获得RNA甲基化酶TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系。通过本发明所获得细胞系,性状稳定,为进一步为研究TRDMT1基因功能提供可靠的细胞模型,也为RNA甲基化功能研究提供一种有效的方法。 | ||
搜索关键词: | 基因敲除 甲基化酶 抗生素筛选基因 构建 同源重组载体 转录终止信号 第一外显子 转录 功能研究 基因功能 抗性筛选 片段整合 细胞模型 性状稳定 甲基化 转染 基因 应用 研究 | ||
【主权项】:
一种RNA甲基化酶TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系的构建方法,其特征在于,通过两个分别包含抗生素筛选基因的同源重组载体、gRNA载体TRDMT1‑gRNA,以及表达Cas9的载体混合转染HEK293细胞,将两个抗生素筛选基因和转录终止信号片段整合到TRDMT1基因的第一外显子前,以终止其转录,通过抗性筛选,获得RNA甲基化酶TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系。
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