[发明专利]一种流感病毒亚单位疫苗纯化方法及其应用

摘要

本发明提供了一种含有四步纯化工艺的流感病毒亚单位疫苗的制备方法和由所述方法制备得到的疫苗，本发明提供的流感病毒亚单位疫苗四步纯化工艺，弥补了现有技术中三步纯化工艺的不足，既降低了疫苗中卵清蛋白的含量，又增强了病毒裂解效果，提高了HA等有效抗原物质的含量。 1

主权项

1.一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，所述方法的步骤包括：(1)病毒的增殖、浓缩；(2)病毒裂解前纯化；(3)病毒的裂解；(4)裂解液的纯化；(5)裂解液的灭活；(6)灭活液的洗滤纯化，其特征在于，所述的步骤(2)病毒裂解前纯化所用方法为密度梯度离心法，

所述的步骤(3)病毒的裂解为病毒裂解与蔗糖密度梯度离心同时进行。

2.根据权利要求1所述的一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述的步骤(2)病毒裂解前纯化中包括：1)制作蔗糖密度梯度；2)上样与离心；3)加入液体进行循环；4)收集目标液。

3.根据权利要求1所述的一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述的步骤(3)病毒的裂解中包括：1)制作蔗糖密度梯度；2)上样与离心；3)加入液体进行循环；4)收集目标液。

4.根据权利要求1所述的一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述的步骤(4)裂解液的纯化中是以凝胶层析，离子交换层析，吸附层析以及亲和层析中的一种或者两种以上的方法进行纯化。

5.根据权利要求1所述的一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述的步骤(6)灭活液的洗滤纯化是对病毒灭活液进行洗滤去除杂质。

6.根据权利要求1所述的一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述的步骤(1)病毒的增殖、浓缩中包括：1)工作种子批毒种稀释；2)接种；3)培养；4)病毒收获；5)离心澄清合并；6)病毒合并液浓缩。

7.根据权利要求1所述的一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述的步骤(5)裂解液的灭活中，用甲醛，戊二醛，高锰酸钾，环氧乙烷，过氧乙酸，过氧化氢，二氧化氯，辛酸盐，β‑丙内酯中的一种或两种以上对纯化得到的蛋白进行灭活。

8.根据权利要求1所述的一种制备流感病毒亚单位疫苗的方法，其特征在于，所述的制备流感病毒亚单位疫苗的方法还包括步骤(7)半成品配制。

9.一种流感病毒亚单位疫苗，所述的疫苗的制备方法为：(1)病毒的增殖、浓缩；(2)病毒裂解前纯化；(3)病毒的裂解；(4)裂解液的纯化；(5)裂解液的灭活；(6)灭活液的洗滤纯化，其特征在于，所述的疫苗是用于预防由甲型流感病毒，乙型流感病毒，丙型流感病毒引起的流感。

10.根据权利要求9所述的一种流感病毒亚单位疫苗，其特征在于，所述的流感由HANA流感病毒和/或B型流感病毒引起的流感，所述HA是指H1～H16，所述NA是指N1～N10，所述HANA是由H1～H16与N1～N10排列组合成的，所述B型流感病毒选自Victoria系和/或Yamagata系。